JPH3,一個(gè)新的甲基化調(diào)控的胃腸腫瘤抑癌基因.pdf

1、在世界范圍內(nèi)，胃腸道腫瘤是人類最常見且最主要的導(dǎo)致癌癥死亡的惡性腫瘤之一。近年來，腫瘤抑癌基因的表觀遺傳調(diào)控失調(diào)被認(rèn)為是腫瘤發(fā)生與發(fā)展的重要機(jī)制。
　　 目的：我們發(fā)現(xiàn)了膜耦聯(lián)的關(guān)鍵蛋白Junctophilin(JPH)的成員JPH3，該基因在胃腸道腫瘤中啟動(dòng)子被甲基化，因此我們希望通過相關(guān)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步驗(yàn)證該基因的功能并闡明其與胃腸道腫瘤發(fā)生和發(fā)展的可能機(jī)制。
　　 方法：通過MSP(methylation-specifi

2、cPCR)和BGS(bisulfitegenomesequencing)檢測JPH3的甲基化狀態(tài)；通過半定量RT-PCR和免疫組化檢測正常組織和腫瘤組織中JPH3的表達(dá)水平，并分析其與胃腸道腫瘤臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系；通過體外轉(zhuǎn)染，獲得穩(wěn)定表達(dá)JPH3的胃癌和大腸癌細(xì)胞株，觀察體外JPH3對(duì)細(xì)胞表型的影響，包括細(xì)胞的增殖能力和細(xì)胞的遷移能力等，并通過檢測細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度、線粒體膜蛋白電位、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)和細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)及主要的細(xì)

3、胞內(nèi)信號(hào)通路蛋白，初步探討JPH3抑制腫瘤細(xì)胞惡性表型的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：JPH3在大多數(shù)腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中表達(dá)沉默或降低，而且在這些表達(dá)沉默或降低的腫瘤細(xì)胞和腫瘤組織中JPH3均被檢測到高度甲基化，但在胃腸道正常粘膜組織中JPH3卻未被檢測到甲基化的發(fā)生。JPH3蛋白在胃腸道正常粘膜組織中呈高表達(dá)(正常胃粘膜組織中高表達(dá)率：100％；正常腸粘膜組織中高表達(dá)率：100%)，而在大部分胃腸腫瘤組織中出現(xiàn)表達(dá)缺失或減低(僅3

4、9.6%的胃癌樣本顯示高表達(dá)；14.9%的腸癌樣本顯示高表達(dá))。JPH3蛋白的低表達(dá)與胃癌的較差的分化程度、有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、較差的侵潤深度、較差的臨床分期和預(yù)后均有密切的關(guān)系，均具有顯著的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)。細(xì)胞株轉(zhuǎn)染JPH3后，結(jié)果發(fā)現(xiàn)JPH3能抑制腫瘤細(xì)胞的生長和移行、促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的凋亡；增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，激發(fā)和促進(jìn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激反應(yīng)；引起線粒體膜電位降低，使細(xì)胞質(zhì)內(nèi)細(xì)胞色素C和Smac蛋白表達(dá)增加；引起TRB3表

5、達(dá)增加，抑制Akt蛋白磷酸化。
　　 結(jié)論：JPH3是一個(gè)受表觀遺傳學(xué)調(diào)控的基因，其在胃癌和腸癌中表達(dá)沉默或降低，且DNA甲基化是導(dǎo)致JPH3在胃腸道腫瘤中表達(dá)沉默或降低的主要原因。JPH3的蛋白表達(dá)水平與腫瘤的分化、分期和預(yù)后有顯著的相關(guān)性。作為一個(gè)胃腸道腫瘤潛在的抑癌基因，JPH3轉(zhuǎn)入腫瘤細(xì)胞株后抑制了腫瘤細(xì)胞的增殖和移行，并可能通過與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激協(xié)同作用下，經(jīng)線粒體途徑和TRB3-Akt信號(hào)通路途徑促進(jìn)了細(xì)胞凋亡，抑制了腫瘤