宮內(nèi)生長受限抑制胎兒腦功能發(fā)育及孕鼠補(bǔ)充?；撬岽龠M(jìn)生長受限胎鼠神經(jīng)元增殖研究.pdf

1、研究目的：
　　1、宮內(nèi)生長受限(intrauterine growth restriction,IUGR)是臨床常見并發(fā)癥,而且大多數(shù)IUGR胎兒出生后即為小于胎齡兒(small for gestational age,SGA)。近年來,IUGR對(duì)胎兒腦發(fā)育的不良影響受到高度關(guān)注,明顯增加兒童神經(jīng)發(fā)育障礙和不良神經(jīng)心理的發(fā)生風(fēng)險(xiǎn),導(dǎo)致學(xué)習(xí)和記憶功能障礙,以及成年期較低的學(xué)術(shù)成就和較差的專業(yè)表現(xiàn)等不良預(yù)后。但 IUGR是否影響胎兒

2、腦功能的發(fā)育尚不明確。在本項(xiàng)研究中,通過應(yīng)用振幅整合腦電圖(amplitude integrated electroencephalography,aEEG),監(jiān)測生后3d內(nèi)足月SGA腦功能的變化,并與同期出生的足月適于胎齡兒(appropriate for gestational age,AGA)對(duì)比,以了解IUGR是否會(huì)對(duì)胎兒腦功能發(fā)育造成不良影響。
　　2、IUGR所致腦損傷始于宮內(nèi),故出生后所采取措施難以從根本上改善IUG

3、R患兒的神經(jīng)系統(tǒng)不良預(yù)后,而積極產(chǎn)前干預(yù)是改善 IUGR預(yù)后的根本途徑。牛磺酸是胎兒-新生兒中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的必需氨基酸,而蛋白激酶A-(protein kinase A)-鈣/鈣調(diào)素依賴性蛋白激酶Ⅱ(Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase III)/c-fos(PKA-CaMKⅡ/c-fos)信號(hào)通路是調(diào)節(jié)中樞神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育的重要途徑之一,故本研究在國家自然科學(xué)基金(81170577)的資助下,

4、擬通過建立IUGR模型(SD大鼠),采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(real time-Polymerase chain reaction,RT-PCR)、蛋白免疫印跡(western-blot,WB)及免疫組化的方法,檢測孕鼠IUGR胎鼠腦組織中牛磺酸對(duì)PKA、CaMK II、c-fos關(guān)鍵信號(hào)分子和腦組織神經(jīng)元特異性烯醇化酶(neuron-specific enolase,NSE)表達(dá)的影響,以探討孕鼠補(bǔ)充?；撬崾欠窨赏ㄟ^調(diào)節(jié)該信號(hào)通路的

5、活性而促進(jìn)IUGR胎鼠腦細(xì)胞增殖,為產(chǎn)前補(bǔ)充?；撬岽龠M(jìn)IUGR胎兒腦發(fā)育提供新的理論依據(jù)。
　　研究方法：
　　1、臨床研究:選擇2012年08月01日至2013年02月28日在北京軍區(qū)總醫(yī)院附屬八一兒童醫(yī)院新生兒科住院、胎齡37～40+6周的足月小于胎齡兒(SGA)60例和適于胎齡兒(AGA)40例。2組患兒均無出生時(shí)無窒息史,并除外驚厥、顱內(nèi)出血、腦室周圍白質(zhì)軟化、顱內(nèi)感染、膽紅素腦病及先天性畸形等疾病。使用 CFM60

6、00型振幅整合腦電圖(amplitude-integrated electroencephalography,aEEG)儀于生后3d內(nèi)進(jìn)行監(jiān)測記錄。比較2組嬰兒腦電波形的連續(xù)性、睡眠-覺醒周期(sleep wake cycling,SWC)、爆發(fā)間期(interburst interval,IBI)、最低和最高電壓等指標(biāo)的差異。所有資料在Excel上建立數(shù)據(jù)文件,使用SPSS16.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,P<0.05認(rèn)為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

7、r>　　2、實(shí)驗(yàn)研究:采用全程低蛋白飲食法建立IUGR模型,將雌性大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組、IUGR組及IUGR+孕鼠補(bǔ)充?；撬峤M(牛磺酸組),每組5只。
　　采用RT-PCR監(jiān)測各組胎鼠腦組織PKA、CaMKⅡ、c-fos-mRNA的表達(dá)水平,WB方法檢測各組胎鼠腦組織PKA、CaMK II、c-fos蛋白表達(dá),免疫組織化學(xué)方法檢測各組胎鼠腦組織PKA、CaMK II、c-fos、NSE陽性細(xì)胞數(shù)。
　　研究結(jié)果：
　　1

8、、臨床研究結(jié)果:
　　⑴SGA連續(xù)性腦電圖的出現(xiàn)率、睡眠-覺醒周期出現(xiàn)率低于適于胎齡兒,爆發(fā)間期長于適于胎齡兒,最高電壓與最低電壓均低于適于胎齡兒,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　⑵對(duì)出生體重低于同胎齡第5~10百分位、第3～5百分位和低于第3百分位者的aEEG指標(biāo)分別進(jìn)行了比較,結(jié)果表明不同出生體重百分位小于胎齡兒連續(xù)性腦電圖的出現(xiàn)率、睡眠-覺醒周期的出現(xiàn)率、爆發(fā)間期以及最低和最高電壓差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05

9、)。
　?、菍?duì)不同胎齡 SGA各指標(biāo)分別比較,除最低電壓外,其它指標(biāo)均無差異(P>0.05)。對(duì)不同胎齡AGA各指標(biāo)分別比較,均無差異(P>0.05)。
　?、炔煌g時(shí),~37+6W組患兒,其 SGA組與 AGA組最低電壓無明顯差別(P>0.05),其他各胎齡組(~38+6W、~39+6W、~40+6W)患兒,其SGA組連續(xù)性腦電圖的出現(xiàn)率、睡眠-覺醒周期出現(xiàn)率低于AGA組,爆發(fā)間期長于AGA組,最高電壓與最低電壓均低于A

10、GA組,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　⑸對(duì)單純低血糖組(血糖<2.2μmol/L、但未發(fā)生低血糖腦病)與正常血糖組各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)aEEG連續(xù)性、周期性、爆發(fā)間期、最高電壓與最高電壓等指標(biāo)之間差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　?、蕦?duì)單純高膽紅素血癥(血膽紅素值>220μmol/L、但未發(fā)生膽紅素腦病)與正常血膽紅素組各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行比較,發(fā)現(xiàn)aEEG連續(xù)性、周期性、爆發(fā)間期、最高電壓與最高電壓等指標(biāo)之間差異

11、均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2、實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果:
　?、臨T-PCR:IUGR組胎鼠腦組織PKA、CaMK II、c-fos-mRNA表達(dá)水平均明顯降低(P<0.05),而牛磺酸組各指標(biāo)-mRNA表達(dá)均顯著增高(P<0.05)。
　　⑵WB:IUGR組胎鼠腦組織中PKA、CaMK II、c-fos蛋白表達(dá)水平均顯著下降(P<0.05),而孕鼠補(bǔ)充?；撬峥娠@著增加其腦組織中 PKA、CaMK II、c-fos蛋白

12、表達(dá)水平(P<0.05)。
　　⑶免疫組化:
　　PKA陽性表達(dá)主要位于胞漿,呈棕黃色。IUGR胎鼠大腦海馬內(nèi)僅有少量PKA陽性細(xì)胞分布,?；撬峤MPKA陽性細(xì)胞數(shù)量明顯增多(P<0.05)。
　　CaMK II陽性表達(dá)也主要位于細(xì)胞質(zhì),呈棕黃色,IUGR胎鼠大腦海馬內(nèi)僅有少量 CaMK II陽性細(xì)胞分布,而?；撬峤M CaMKⅡ陽性細(xì)胞數(shù)目明顯增加(P<0.05)。
　　c-fos陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞核,呈棕黃色,

13、只有少數(shù)的c-fos陽性細(xì)胞在IUGR胎鼠大腦海馬中分布,而孕鼠補(bǔ)充?；撬岷骳-fos陽性細(xì)胞數(shù)量較模型組明顯增多(P<0.05)。
　　NSE陽性表達(dá)主要位于細(xì)胞質(zhì),呈棕黃色,IUGR組胎鼠腦組織NSE陽性細(xì)胞數(shù)較對(duì)照組明顯減少(P<0.05),而?；撬峤M胎鼠腦組織中 NSE陽性細(xì)胞數(shù)較IUGR組明顯增多(P<0.05)。
　　結(jié)論：
　　1、IUGR可抑制胎兒腦功能發(fā)育:表現(xiàn)為患兒腦電波連續(xù)性差、缺乏睡眠-覺醒周期