攜帶BRCA雜合性突變的卵巢表面上皮細(xì)胞BTAK的表達(dá)和卵巢癌發(fā)生機(jī)制的研究.pdf

1、目的：明確BRCA1/2雜合性突變卵巢表面上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變，在預(yù)防性卵巢切除標(biāo)本中BTAK和p53的表達(dá)水平，進(jìn)一步探討B(tài)RCA雜合性突變的卵巢上皮細(xì)胞中BTAK與p53的關(guān)系以及卵巢癌的發(fā)生機(jī)制。 方法： 1.攜帶BRCA雜合性突變的卵巢表面上皮細(xì)胞形態(tài)學(xué)的改變： 選取32例BRCA1/2雜合性突變病人的卵巢、27例正常卵巢，HE染色后，在顯微鏡下觀察其病理形態(tài)學(xué)改變。觀察指標(biāo)：表面上皮內(nèi)陷，上皮包涵囊腫，

2、皮質(zhì)間質(zhì)增生，砂粒體，子宮內(nèi)膜異位，表面乳頭狀突起，乳頭狀瘤病，上皮增生(專指上皮細(xì)胞假復(fù)層，即有多層核)，上皮細(xì)胞的異型性(專指在上皮增生基礎(chǔ)上有不典型性、多形性和極性消失)。 2.攜帶BRCA雜合性突變的卵巢表面上皮細(xì)胞BTAK的表達(dá)： 32例BRCA1/2雜合性突變病人的卵巢、27例正常卵巢以及194例卵巢癌的組織芯片，免疫組織化學(xué)標(biāo)記BTAK蛋白，圖像分析檢測光密度值，統(tǒng)計(jì)分析表達(dá)水平的差異；1個BRCA1突變的

3、細(xì)胞株OSE76和3個沒有突變的細(xì)胞株OSE72，OSE103和OSE137，用Western Blot方法檢測BTAK蛋白表達(dá)的差異。 3.攜帶BRCA雜合性突變的卵巢表面上皮細(xì)胞p53的表達(dá)及卵巢癌的發(fā)生機(jī)制的研究： 32例BRCA1/2雜合性突變病人的卵巢、27例正常卵巢以及194例卵巢癌的組織芯片，用免疫組織化學(xué)方法標(biāo)記p53蛋白，統(tǒng)計(jì)分析表達(dá)水平的差異以及BTAK與p53表達(dá)的關(guān)系；用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體方法構(gòu)建含p

4、53siRNA的表達(dá)載體，阻斷p53基因，來研究BTAK的表達(dá)情況，從而進(jìn)一步掌握BTAK與p53的相互關(guān)系，認(rèn)識其在卵巢癌發(fā)生機(jī)制中的作用。 結(jié)果： 1.BRCA突變組和正常卵巢組的表面上皮細(xì)胞，兩者的病理形態(tài)學(xué)改變有顯著差異，表現(xiàn)在上皮增生和上皮細(xì)胞的異型性(p=0.0418和p=0.0289)，BRCA突變組的病變的發(fā)生率比正常卵巢組病變的發(fā)生率顯著增高；而正常卵巢組無病理改變，比BRCA突變組顯著減低(p=0.0

5、341)。同時BRCA突變組與正常卵巢組比較，出現(xiàn)表面上皮內(nèi)陷、間質(zhì)增生和表面乳頭狀突起的，BRCA突變組的發(fā)生率比正常卵巢組的發(fā)生率高，但是統(tǒng)計(jì)學(xué)沒有顯著意義。 2.在正常卵巢、BRCA突變卵巢和卵巢癌中BTAK的表達(dá)：組織學(xué)標(biāo)本中BTAK在21/32(66％)的雜合性BRCA突變攜帶者的卵巢中表達(dá)，在正常卵巢4/27(15％)中表達(dá)(p<0.05)。雜合性BRCA突變攜帶者卵巢與卵巢癌表達(dá)194/194(100％)相比，兩者

6、之間有顯著差異(p<0.05)。在攜帶或不攜帶BRCA1雜合性突變的原代卵巢上皮細(xì)胞株中，Western blot檢查結(jié)果顯示，3個不攜帶BRCA突變的上皮細(xì)胞株(OSE72，OSE103和OSE137)沒有檢測到BTAK的條帶，而攜帶BRCA1突變的上皮細(xì)胞株(OSE76)有特異性的BTAK蛋白的強(qiáng)表達(dá)(46kDa)。 3.在正常卵巢、BRCA突變卵巢和卵巢癌中p53的表達(dá)：組織學(xué)標(biāo)本中p53僅在正常卵巢的1例中(4％)表達(dá)，

7、在BRCA突變攜帶者的卵巢中有10/32(31％)的表達(dá)，這兩者之間無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。卵巢癌表達(dá)最高，有139/194(72％)表達(dá)，與雜合性BRCA突變攜帶者卵巢之間存在顯著差異(p<0.05)。用秩和檢驗(yàn)證實(shí)BTAK表達(dá)與p53表達(dá)有直接的相互關(guān)系(r=0.306．p<0.001)。 4.本文建立了一個穩(wěn)定的SiRNA沉默p53基因。Western blot檢測了OSE76和OSE76/p53i的原代卵巢上皮細(xì)胞

8、中BTAK的表達(dá)水平顯示，感染p53siRNA OSE76細(xì)胞沒有檢測到BTAK的條帶，而攜帶BRCA1突變的上皮細(xì)胞株(OSE76)有特異性的BTAK蛋白的強(qiáng)表達(dá)(46kDa)。 結(jié)論： 1.證明了BRCA雜合性突變的卵巢表面上皮細(xì)胞更易于顯示不典型增生；卵巢癌發(fā)生存在早期病變：表面上皮的不典型增生；預(yù)防性卵巢切除標(biāo)本是研究卵巢癌發(fā)病機(jī)制和早期病變的最佳標(biāo)本。 2.人類攜帶雜合性BRCA胚細(xì)胞突變的卵巢表面上皮

9、細(xì)胞BTAX的蛋白表達(dá)水平增高，且在卵巢表面上皮細(xì)胞內(nèi)可以由雜合性BRCA1或BRCA2突變激活；提出BTAK基因在卵巢癌發(fā)生的早期階段扮演重要角色，BTAK表達(dá)水平升高可能是早期卵巢癌發(fā)生的信號，它可能是潛在的診斷指標(biāo)和基因治療的靶標(biāo)。 3.攜帶雜合性BRCA胚細(xì)胞突變的卵巢表面上皮細(xì)胞p53表達(dá)水平升高，且在卵巢表面上皮細(xì)胞內(nèi)可以由雜合性BRCA1或BRCA2突變激活；證實(shí)BTAK高表達(dá)和p53高表達(dá)密切相關(guān)且可能在卵巢癌的