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文檔簡介
1、目的:觀察馬齒莧提取物對濕疹大鼠皮膚的治療效果,探討單品馬齒莧的藥效以及促進濕疹病變部位修復(fù)的作用機理。
方法:
1.SD大鼠70只,按體重隨機分為7個組,每組10只,分別作為正常組、模型組、Caspase-14基因敲除組、陽性組、馬齒莧提取物高、中、低劑量組。除正常組外,用電推剪及電剃須刀去除腹部毛發(fā),面積約2cm×3cm,并涂5%的2,4-二硝基氯苯(DNCB)30μl于皮膚首次致敏;第5天,在右背部2cm×2c
2、m剃毛區(qū)涂0.2%DNCB50μl進行二次抗原攻擊,左背部對稱的剃毛區(qū)不用藥物作為對照部位。以后每隔3d激發(fā)1次,連續(xù)3次。于第9天觀察大鼠右背部較左背部明顯出現(xiàn)紅斑,水腫,丘疹,糜爛或滲出,表明造模成功。實驗第21天斷頸處死,剪取造模皮膚,用分析天平稱重測量濕疹大鼠皮膚腫脹度;QRT-PCR檢測各實驗組大鼠皮膚Caspase-14和Filaggrin基因表達;免疫組化檢測TNF-α、IL-22、IL-4、IFN-γ積分光密度。
3、 2.另取大鼠50只,隨機分為5組:正常對照組,陽性對照組,馬齒莧低劑量組、中劑量組、高劑量組。各組按規(guī)定的劑量外用給藥。實驗當(dāng)日,用0號砂紙擦傷大鼠剃毛處,局部再涂各組相應(yīng)藥物1次,末次涂藥后10min,開始于創(chuàng)面處滴0.01%磷酸組胺每只0.05mL,此后每隔3min依0.01%,0.02%,0.03%,0.04%…濃度遞增,每一濃度滴加后觀察3min內(nèi)大鼠是否回頭舔右后足背,按此時磷酸組胺總量計算各組大鼠的致癢閡。
結(jié)
4、果:
1.與空白對照組相比,高劑量組小鼠皮膚腫脹度明顯小于空白對照組(P<0.01),中劑量組、陽性藥物組小鼠皮膚腫脹度也小于模型組(P<0.05)。
2.與正常組比較,模型組和Caspase-14基因敲除組大鼠皮膚組織細胞中Caspase-14和 Filaggrin基因的2-△△CT值極顯著減小(P<0.01),與模型組和Caspase-14基因敲除組比較,馬齒莧三個劑量組大鼠皮膚組織細胞中Caspase-14和F
5、ilaggrin基因的2-△△CT值極顯著增大(P<0.01)。
3.與正常組比較,模型組大鼠皮膚組織TNF-α免疫組織化學(xué)檢測積分光密度(IOD)極顯著增大(P<0.01);模型組大鼠皮膚組織IL-22免疫組織化學(xué)檢測積分光密度(IOD)極顯著增大(P<0.01);模型組大鼠皮膚組織IL-4免疫組織化學(xué)檢測積分光密度(IOD)極顯著增大(P<0.01);模型組大鼠皮膚組織 IFN-γ免疫組織化學(xué)檢測積分光密度(IOD)顯著減
6、?。≒<0.05)。
4.磷酸組胺對不同劑量組的致癢閾記錄顯示,馬齒莧提取物中劑量組的致癢閾高于陽性對照組(P<0.05),高劑量組明顯高于陽性對照組(P<0.05)。
結(jié)論:馬齒莧提取物可以使血管收縮,抑制毛細血管通透性,抑制炎性腫脹,從而減輕濕疹局部的瘙癢、水腫癥狀。馬齒莧提取物還可顯著上調(diào)濕疹動物皮膚屏障系統(tǒng)中Caspase-14和Filaggrin基因的表達,提示馬齒莧通過促進Caspase-14基因的表達而
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