中藥壁虎抗腫瘤作用的實驗研究.pdf

1、目的：以中藥壁虎為研究對象，首先進行急性毒性試驗，了解其用藥的安全性；觀察含中藥壁虎的血清體外對人食管癌EC9706、EC1細胞系生長抑制作用，中藥壁虎體內(nèi)對昆明種荷瘤小鼠（小鼠肉瘤 S180）實體瘤的抑瘤作用及對荷瘤小鼠免疫系統(tǒng)的影響，探討壁虎抗腫瘤作用機制；進一步研究了中藥壁虎對環(huán)磷酰胺（CTX）治療小鼠S180實體瘤的增效減毒作用。 方法：急性毒性試驗應(yīng)用中藥急性毒性試驗研究方法，測定小鼠灌胃給藥的半數(shù)致死量LD50及最大

2、給藥量。體外抑瘤實驗應(yīng)用中藥血清藥理學實驗方法，含中藥壁虎血清體外作用于細胞，MTT法測定含不同濃度中藥壁虎血清對食管癌EC9706和EC1細胞系生長的抑制作用并按臺盼藍排染法計數(shù)活細胞數(shù)，繪制細胞生長曲線。體內(nèi)抑瘤實驗建立移植性小鼠肉瘤S180實體瘤模型，荷瘤小鼠隨機分為 5 組，分別為實驗組（高、中、低劑量壁虎粉）、空白對照組和陽性對照組。然后用不同劑量壁虎粉制成的混懸液對實驗組荷瘤小鼠灌胃，空白對照組荷瘤小鼠給予等量生理鹽水灌胃，

3、陽性對照組腹腔注射環(huán)磷酰胺（CTX），用藥14d后通過計算抑瘤率觀察不同劑量的壁虎粉對小鼠肉瘤S180實體瘤的生長抑制作用。壁虎對免疫系統(tǒng)影響方面，在測瘤重的同時測胸腺重、脾臟重，計算胸腺指數(shù)、脾臟指數(shù)，并做腹腔巨噬細胞吞噬雞血紅細胞實驗，計算吞噬率和吞噬指數(shù)。抗腫瘤機制方面以小鼠肉瘤組織為研究對象，用SABC免疫組化法檢測血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)、堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)的蛋白表達，TUNEL方法檢測細胞凋亡率。增效減毒

4、方面，建立移植性小鼠肉瘤S180實體瘤模型，隨機分為對照組、CTX組及壁虎粉高、中、低劑量與CTX聯(lián)合用藥組。觀察藥物對腫瘤的抑制作用及對動物體重、免疫器官重量、白細胞數(shù)的影響。 結(jié)果：急性毒性試驗無法測出壁虎粉的LD50，最大給藥量實驗小鼠未發(fā)現(xiàn)體重減輕及其它異常反應(yīng)，結(jié)果顯示小鼠的最大耐受量超過人臨床用量的108倍。含中藥壁虎的血清體外可抑制食管癌細胞的生長。體內(nèi)中藥壁虎可抑制小鼠肉瘤S180生長，高、中、低劑量組抑瘤率分別

5、為49.8％、52.8％、43.1％；對免疫器官的影響不能提高荷瘤小鼠的胸腺指數(shù)及脾臟指數(shù)，對腹腔巨噬細胞不能增加其吞噬率及吞噬指數(shù)。機制研究方面可降低腫瘤組織VEGF、bFGF蛋白的表達，顯著提高凋亡指數(shù)。增效減毒方面，單用CTX組的抑瘤率達到35.6％ , 同時小鼠增重減慢，胸腺、脾臟也受到顯著抑制，白細胞數(shù)明顯減少；高、中、低劑量壁虎粉與CTX合用3組的抑瘤率分別為63.9％( P<0.01)、60.2％( P<0.01)、53.