版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請(qǐng)進(jìn)行舉報(bào)或認(rèn)領(lǐng)
文檔簡介
1、目的:
1.搜集人腦膜瘤術(shù)后標(biāo)本進(jìn)行原代培養(yǎng)并鑒定。
2.Her2 siRNA慢病毒轉(zhuǎn)染人腦膜瘤細(xì)胞,觀察轉(zhuǎn)染前后細(xì)胞的增殖活性和生物學(xué)行為的改變。
方法:
1.在神經(jīng)外科術(shù)后搜集新鮮的腦膜瘤組織,經(jīng)過原代和傳代培養(yǎng)后獲得的腦膜瘤細(xì)胞,在對(duì)數(shù)生長期用免疫組化法和FISH法對(duì)其進(jìn)行鑒定。
2.將Her2 siRNA慢病毒載體轉(zhuǎn)染到人腦膜瘤細(xì)胞中,倒置顯微鏡在1-4天4個(gè)時(shí)間點(diǎn)觀察病毒的表達(dá)
2、,確定最佳感染復(fù)數(shù)(MOI)。
3.實(shí)驗(yàn)分為三組:①Control組:用含10-15%血清的DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)人的腦膜瘤細(xì)胞;②Mock組:感染空載體的腦膜瘤細(xì)胞;③Her2 siRNA組:感染了Her2 siRNA慢病毒的腦膜瘤細(xì)胞。
4.慢病毒感染72小時(shí)后,用CCK-8法檢測各組腦膜瘤細(xì)胞的增殖抑制率;同時(shí)應(yīng)用RT-PCR法檢測Her2/neu基因的表達(dá)情況;Western blot法檢測Her2、VEGF和K
3、i-67蛋白的表達(dá)情況。
5.將各組細(xì)胞接種至裸鼠腋下檢測成瘤情況。
結(jié)果:
1.搜集新鮮的人腦膜瘤術(shù)后標(biāo)本,進(jìn)行原代培養(yǎng),在10%DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)下,貼壁后呈多角形生長。
2.由上海漢恒股份有限公司建立Her2 siRNA慢病毒載體,包裝產(chǎn)生的病毒滴度為1×108TU/ml。
3.Her2 siRNA慢病毒感染人腦膜瘤細(xì)胞,當(dāng)MOI值為40時(shí),48小時(shí)后鏡下可見少量熒光表達(dá),72小時(shí)
4、后熒光表達(dá)量和強(qiáng)度增加。
4.CCK-8法檢測各組腦膜瘤細(xì)胞的增殖情況:與Control組相比,Her2 siRNA組抑制率最高(P<0.01);而病毒轉(zhuǎn)染后48小時(shí)開始對(duì)腦膜瘤細(xì)胞有抑制作用,72h抑制作用最強(qiáng);而Control組與Mock組相比并無差別(P>0.05)。
5.RT-PCR檢測Her2 mRNA的表達(dá)情況:與Control組、Mock組相比,Her2 siRNA組的mRNA的表達(dá)程度顯著下調(diào)(P<0
5、.01)。
6.Western blot檢測Her2、VEGF、Ki-67蛋白的表達(dá)變化:與Control組與Mock組相比,Her2 siRNA組的蛋白表達(dá)程度顯著下調(diào)(P<0.01);而Control組與Mock組相比無明顯差別(P>0.05)。
7.裸鼠移植瘤變化:與Control組和Mock組相比,Her2 siRNA組的細(xì)胞接種于裸鼠腋下的移植瘤發(fā)展速度明顯減慢(P<0.01),Control組與Mock組
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請(qǐng)下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請(qǐng)聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會(huì)有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲(chǔ)空間,僅對(duì)用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護(hù)處理,對(duì)用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對(duì)任何下載內(nèi)容負(fù)責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請(qǐng)與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準(zhǔn)確性、安全性和完整性, 同時(shí)也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對(duì)自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- HER-2-neu小分子干擾RNA對(duì)腦膜瘤細(xì)胞增殖活性的影響.pdf
- HER2基因?qū)盒阅X膜瘤IOMM-Lee細(xì)胞株增殖和侵襲的影響.pdf
- HER2小分子干擾RNA對(duì)腦膜瘤細(xì)胞增殖影響的研究.pdf
- RNA干擾her2-neu基因表達(dá)抑制肺癌A549細(xì)胞增殖的研究.pdf
- RNA干擾HER2-neu對(duì)膀胱癌BIU-87細(xì)胞增殖和凋亡的影響.pdf
- 惡性腦膜瘤細(xì)胞對(duì)HER2靶向藥物敏感性的研究.pdf
- HER2-neu聯(lián)合細(xì)胞表位的預(yù)測篩選、基因克隆、表達(dá)及鑒定.pdf
- 尼美舒利對(duì)腦膜瘤細(xì)胞ETS-1及MMP-1表達(dá)和對(duì)腦膜瘤細(xì)胞增殖及凋亡的影響.pdf
- 腦膜瘤(2)
- HER2-neu在腎癌中的表達(dá)及意義.pdf
- 針對(duì)HER2-neu的siRNA對(duì)非小細(xì)胞肺癌生長的抑制作用.pdf
- RIZ1基因在腦膜瘤組織中的表達(dá)及其在腦膜瘤惡性增殖中的功能研究.pdf
- 腦膜瘤
- 腦室內(nèi)腦膜瘤(2)
- PPAR—γ在腦膜瘤中的基因和蛋白表達(dá)及曲格列酮對(duì)腦膜瘤細(xì)胞生長的作用的探討.pdf
- 遺傳改造的骨髓來源樹突細(xì)胞對(duì)her2-neu過表達(dá)腫瘤的預(yù)防和治療研究.pdf
- HER2-PI3K-AKT通路在惡性腦膜瘤細(xì)胞生長、遷移中的作用.pdf
- 乳腺癌HER2-neu基因熒光原位雜交診斷體系的建立及應(yīng)用.pdf
- 眼眶腦膜瘤
- 種腦膜瘤
評(píng)論
0/150
提交評(píng)論