溫針灸對兔膝骨性關(guān)節(jié)炎軟骨細(xì)胞JNK信號通路及MMP-1、13表達(dá)的影響.pdf

1、目的：觀察溫針灸治療前后 MMP-1、13的表達(dá)，以及 JNK信號通路中JNK1、2的表達(dá)情況，探討溫針灸治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的作用機(jī)理。
　　方法：新西蘭大耳兔40只，隨機(jī)分為溫針灸組、針刺組、模型組和空白對照組，采用右后肢膝關(guān)節(jié)伸直位石膏固定法制備兔膝骨性關(guān)節(jié)炎模型。造模完成后，溫針灸組在鶴頂、內(nèi)外膝眼予以溫針灸，灸一柱；針刺組在鶴頂、內(nèi)外膝眼予以針刺，留針15分鐘，兩組均每日1次，6天為一個(gè)療程，中間休息1天，共治療2個(gè)療程；模

2、型組每天在兔架上固定15min；空白對照組不做任何干預(yù)，正常飼養(yǎng)。治療結(jié)束后取材。參考彭太平大體觀察法及 HE染色觀察膝關(guān)節(jié)組織形態(tài)學(xué)變化；采用雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA)檢測造模前、治療前和治療后兔血清中MMP-1、13表達(dá)變化；免疫組化檢測關(guān)節(jié)軟骨中MMP-1、13的表達(dá)變化；Western Blot法檢測 JNK1、2蛋白的表達(dá)變化。所有結(jié)果均采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　1、大

3、體觀察結(jié)果顯示模型組關(guān)節(jié)面不光滑，無光澤，有骨贅形成，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；溫針灸組關(guān)節(jié)面光滑，稍欠光澤，表面干凈，與模型組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；針刺組關(guān)節(jié)面欠光滑、欠關(guān)澤，無骨贅形成，與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　2、HE染色結(jié)果顯示：空白對照組軟骨表面光滑，結(jié)構(gòu)完整，軟骨細(xì)胞排列整齊，呈四層，染色均勻；模型組軟骨變薄，軟骨細(xì)胞數(shù)量減少，可見軟骨細(xì)胞成簇排列

4、，排列紊亂；溫針灸組軟骨細(xì)胞增多，且排列整齊，軟骨邊緣光滑；針刺組軟骨稍欠光滑，軟骨細(xì)胞偶可見成簇排列，細(xì)胞數(shù)目稍增多，排列較整齊。
　　3、治療前后血清中MMP-1、13的表達(dá)水平比較：除空白對照組外，各組治療前較造模前血清 MMP-1、13的濃度均顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；治療結(jié)束后，模型組與空白對照組比較，血清 MMP-1、13表達(dá)升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；溫針灸組血清 MMP-1和MMP-1

5、3表達(dá)較模型組顯著降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，較針刺組有降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；針刺組與模型組比較，血清中MMP-1、13表達(dá)量有所降低，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　4、免疫組化檢測光學(xué)顯微鏡下 MMP-1、13表達(dá)的陽性結(jié)果分布：空白對照組中MMP-1、13只有散在的陽性表達(dá)，且表達(dá)不明顯；模型組軟骨細(xì)胞著色相對較深，以棕黃色、褐色顆粒為主，且細(xì)胞外基質(zhì)中也有少量著色；溫針灸組軟骨細(xì)胞

6、 MMP-1、13的陽性表達(dá)主要以淺棕褐色的顆粒為主，表層稍有分布深褐色顆粒；針刺組的陽性表達(dá)較為明顯，而且表層與中層顏色較深的棕黃色顆粒分布較高。
　　5、免疫組化檢測關(guān)節(jié)軟骨中MMP-1、13的表達(dá)水平變化：與空白對照組比較，模型組 MMP-1、13蛋白的表達(dá)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；溫針灸組與模型組比較，MMP-1、13的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；針刺組與模型組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（

7、P>0.05）；針刺組與溫針灸組比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。
　　6、Western Blot檢測關(guān)節(jié)軟骨中JNK1、2的表達(dá)水平變化：經(jīng)灰度值分析，模型組軟骨中JNK1、2的表達(dá)量明顯增高，與空白對照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；溫針灸組與模型組比較，JNK1、2的表達(dá)明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；針刺組與模型組比較，JNK1、2的表達(dá)下降，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；針刺組與溫針灸