反應(yīng)停對(duì)膠原誘導(dǎo)型關(guān)節(jié)炎大鼠關(guān)節(jié)炎癥的影響.pdf

1、目的：類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是一種慢性進(jìn)行性自身免疫性疾病，以關(guān)節(jié)滑膜炎，對(duì)稱性、破壞性的關(guān)節(jié)病變?yōu)橹饕卣鳌２∏橹鸩竭M(jìn)展，最終導(dǎo)致關(guān)節(jié)功能障礙、致殘。其病因尚不完全明確，多種免疫活性細(xì)胞的活化，細(xì)胞因子、炎癥介質(zhì)的共同參與，血管翳的形成是造成疾病發(fā)生、發(fā)展的重要原因。目前，改善癥狀的抗風(fēng)濕藥是RA的主要治療手段，針對(duì)某些細(xì)胞因子的生物制劑在國內(nèi)臨床的應(yīng)用還處于起步階段。由于傳統(tǒng)抗風(fēng)濕藥的毒副作用

2、較大，而生物制劑價(jià)格昂貴，因而患者長期服用依從性差，不利于疾病控制，因此選擇一種價(jià)效比良好的抗風(fēng)濕藥物勢(shì)在必行。反應(yīng)停是一種免疫調(diào)節(jié)劑和抗血管生成藥，已應(yīng)用于風(fēng)濕性疾病的臨床治療，但國內(nèi)對(duì)于RA的療效罕有報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以Ⅱ型膠原誘導(dǎo)型性關(guān)節(jié)炎(CIA)大鼠模型為基礎(chǔ)，從關(guān)節(jié)腫脹程度、血漿及滑膜組織腫瘤壞死因子-α(tumor necrosisfactor alpha TNF-α)、血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial

3、growth factor VEGF)濃度的變化、關(guān)節(jié)病理改變、放射學(xué)改變幾方面，觀察反應(yīng)停對(duì)關(guān)節(jié)炎的影響，評(píng)價(jià)其療效，探討反應(yīng)停治療RA的機(jī)制及臨床應(yīng)用價(jià)值。 方法：(1)將成年雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為Ⅰ組(正常對(duì)照組)、Ⅱ組(單純?cè)炷＝M)、Ⅲ組(造模+反應(yīng)停治療組)、Ⅳ組(造模+甲氨喋呤治療組)。Ⅱ～Ⅳ組多點(diǎn)皮內(nèi)注射Ⅱ型膠原與完全弗氏佐劑的乳化劑，21天后腹腔注射加強(qiáng)免疫，誘導(dǎo)出關(guān)節(jié)炎模型。(2)從免疫后第12天開始Ⅲ組

4、、Ⅳ組分別給予反應(yīng)停200mg/kg·d、甲氨喋呤2.7mg/kg.w灌胃治療。(3)測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠的踝關(guān)節(jié)外徑，并進(jìn)行關(guān)節(jié)炎指數(shù)(At)評(píng)定。(4)采用雙抗體夾心ELISA法測(cè)定不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠血漿TNF-α、VEGF濃度。(5)對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠滑膜組織進(jìn)行TNF-α、VEGF的SP免疫組織化學(xué)染色，采用真彩病理圖像分析系統(tǒng)進(jìn)行定量分析。(6)觀察不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠踝關(guān)節(jié)病理改變，并進(jìn)行病理積分評(píng)定。(7)觀察各組大鼠踝

5、關(guān)節(jié)放射學(xué)改變出現(xiàn)的時(shí)間。(8)應(yīng)用SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。 結(jié)果：(1)AI：第Ⅱ組大鼠造模后各時(shí)間點(diǎn)AI均高于第Ⅰ組(P<0.01)，高峰出現(xiàn)在造模后21～28天；第Ⅲ組于造模后35～60天AI低于第Ⅱ組(P<0.05)；Ⅲ、Ⅳ組間AI無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。(2)踝關(guān)節(jié)外徑：第Ⅱ組大鼠造模后14天踝關(guān)節(jié)外徑高于第Ⅰ組(P<0.01)，第21天腫脹達(dá)到高峰，之后逐漸下降，直到60天仍高于正常組(P<0.0

6、1)；Ⅲ、Ⅳ組于造模后第21天踝關(guān)節(jié)外徑高于第Ⅰ組(P<0.01)，并達(dá)到腫脹高峰，至造模后60天與第1組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；Ⅲ組于造模后第28天踝關(guān)節(jié)外徑低于造模組(P<0.05)，較Ⅳ組提前1周。(3)血漿TNF-α、VEGF濃度：第Ⅱ組造模后7天血漿TNF-α、VEGF水平均高于第Ⅰ組(P<0.05)，21天達(dá)到高峰后逐漸下降，其中TNF-α濃度于35天自行降至正常水平(P>0.05)，42天出現(xiàn)第二高峰；Ⅲ組、Ⅳ組血漿

7、TNF-α、VEGF濃度分別在14、21天低于第Ⅱ組(P<0.05)；Ⅲ組、Ⅳ組之間兩種細(xì)胞因子水平無統(tǒng)計(jì)學(xué)差別(P>0.05)。(4)滑膜TNF-α及VEGF的積分光密度(IOD)值、微血管密度(MND)、踝關(guān)節(jié)病理積分：造模后各時(shí)間點(diǎn)，第Ⅱ組均顯著高于第Ⅰ組，有統(tǒng)計(jì)學(xué)差別；Ⅲ組TNF-α的IOD值在造模后21～60天低于Ⅱ組，VEGF的IOD值、MVD、踝關(guān)節(jié)病理積分均在14～60天低于Ⅱ組，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。(5)相關(guān)性分析：AI與

8、踝關(guān)節(jié)外徑呈直線正相關(guān)；血漿及滑膜中TNF-α與VEGF水平分別呈直線正相關(guān)，同時(shí)二者分別與踝關(guān)節(jié)外徑、MVD、病理積分呈直線正相關(guān)。(6)放射學(xué)改變時(shí)間：第Ⅲ、Ⅳ組出現(xiàn)時(shí)間分別為造模后39.2±4.89天、39.8±5.90天，晚于第Ⅱ組23.8±3.61天(P<0.01)。 結(jié)論：(1)AI與踝關(guān)節(jié)外徑呈直線正相關(guān)，均能反映關(guān)節(jié)腫脹情況，后者方法更為精確、客觀。(2)造模后血漿及滑膜TNF-α、VEGF水平明顯升高，并均與踝

9、關(guān)節(jié)外徑呈正相關(guān)，提示這兩種細(xì)胞因子在RA病理過程中發(fā)揮重要作用。(3)造模組血漿及滑膜TNF-α、VEGF水平均呈正相關(guān)，二者相互影響，在RA病理過程中形成惡性網(wǎng)絡(luò)。 (4)CIA大鼠滑膜VEGF表達(dá)、MVD值顯著高于正常組，且二者呈正相關(guān)，說明VEGF是促進(jìn)血管翳形成的關(guān)鍵細(xì)胞因子，在RA滑膜炎癥之后的滑膜增生、軟骨和骨破壞的病理過程中發(fā)揮著重要作用。(5)反應(yīng)?？梢酝ㄟ^降低CIA大鼠TNF-α、VEGF水平減輕癥狀。(6)反應(yīng)?？?/p>