胸腺五肽長(zhǎng)效制劑的制備與評(píng)價(jià).pdf

1、胸腺五肽(Thymopentin，TP5)是一種由5個(gè)氨基酸構(gòu)成的人工合成小分子肽，與內(nèi)源性的胸腺生成素Ⅱ具有相同的調(diào)節(jié)機(jī)體免疫平衡的生物活性。對(duì)于多種免疫功能紊亂或低下，TP5都能通過促進(jìn)或抑制的雙向調(diào)節(jié)作用使免疫功能趨于正常，已廣泛應(yīng)用于臨床。由于TP5體內(nèi)半衰期很短，但其治療的疾病一般都需要長(zhǎng)期用藥，而目前可供臨床應(yīng)用的又僅有凍干粉針劑和溶液型注射劑，所以只能采取頻繁注射或靜脈滴注的方式給藥，給患者帶來了極大的痛苦和精神壓力。

2、 為了提高TP5的用藥質(zhì)量和患者的順應(yīng)性，本文選用可生物降解的乳酸羥基乙酸共聚物(PL,GA)和聚乳酸(PLA)為骨架材料，將TP5制成長(zhǎng)效注射微球(TP5-MS)與長(zhǎng)效植入劑(TP5-IP)，考察了上述兩種長(zhǎng)效制劑的制備工藝，并對(duì)其在體內(nèi)外的緩釋效果以及在動(dòng)物體內(nèi)的藥效進(jìn)行了評(píng)價(jià)。 采用復(fù)乳一溶媒蒸發(fā)法(w/o/w)制備TP5-PLGA微球，制得的微球球形圓整，粒徑較均勻。建立了TP5-PLGA 微球含量測(cè)定方法，通過單因

3、素實(shí)驗(yàn)考察了外水相聚乙烯醇(PVA)濃度、油相PLGA濃度、制備復(fù)乳的攪拌速度、內(nèi)外水相體積比和外水相滲透壓等因素對(duì)微球粒徑和包封率的影響。由于TP5分子量小且具有很強(qiáng)的親水性，改變這些工藝參數(shù)雖然能夠在一定范圍內(nèi)提高微球的包封率，但包封率始終低于60％，而且通過單因素實(shí)驗(yàn)優(yōu)化的處方體外釋放存在明顯的突釋現(xiàn)象，且持續(xù)釋放時(shí)間較短。利用明膠在低溫條件下形成凝膠及其在中性pH條件下與TP5帶有不同電荷二者間存在靜電相互作用的性質(zhì)能夠抑制TP

4、5向外水相擴(kuò)散，提高藥物包封率。采用星點(diǎn)設(shè)計(jì)優(yōu)化并確定了內(nèi)水相中含有明膠作為增稠劑的微球(TP5-gel-MS)的處方和制備工藝，油相PLGA濃度和外水相PVA濃度以及攪拌速度對(duì)微球的包封率和突釋有顯著影響。優(yōu)化后的微球平均粒徑約為40μm，包封率約為60％。體外試驗(yàn)結(jié)果表明，該制劑首日的累積釋放量為33.0％，隨后藥物以零級(jí)速率持續(xù)釋放2周。 采用擠出成型法制備 TP5-PLGA/PLA 長(zhǎng)效植入劑，藥物包封率可達(dá)99％，載藥

5、量對(duì)植入劑的突釋和持續(xù)釋放時(shí)間具有顯著影響，載藥量為1％的植入劑無明顯突釋效應(yīng)，首日體外累計(jì)釋放量小于7％，且能平穩(wěn)釋放達(dá)40天，釋藥特性符合零級(jí)過程。 考察了TP5-gel-MS與載藥量為1％的TP5-IP兩種制劑在大鼠體內(nèi)的釋放特性，并以免疫抑制SD大鼠為模型動(dòng)物，外周血CD<,4><'+>/CD<,8><'+>比值的變化為藥效學(xué)指標(biāo)，采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)上述兩種制劑進(jìn)行了體內(nèi)藥效學(xué)評(píng)價(jià)。與體外釋放相比，TP5-gel-MS

6、與TP5-IP的體內(nèi)突釋劑量顯著增大 (第1天的釋放百分率分別為41.3％和14.8％)，但后續(xù)可保持零級(jí)速率分別持續(xù)釋藥12天和28天以上，而且二者的體內(nèi)外釋放具有良好的相關(guān)性。在隨后進(jìn)行的藥效學(xué)研究中，首先給予大鼠注射環(huán)磷酰胺建立起免疫抑制動(dòng)物模型，在此基礎(chǔ)上，給予各組TP5長(zhǎng)效制劑后，2周內(nèi)可以觀察到TP5-gel-MS組(劑量分別為每只大鼠0.536mg和0.804mg)的動(dòng)物免疫力增強(qiáng)，而且CD<,4><'+>/CD<,8><

7、'+>比值顯著高于空白微球組。除了低劑量組(每只大鼠0.268mg)外，中、高劑量組(劑量分別為每只大鼠0.536mg和0.804mg) TP5-IP在1個(gè)月內(nèi)能增強(qiáng)大鼠的免疫力，而且CD<,4><'+>/CD<,8><'+>比值高于每日給予普通注射劑的對(duì)照組，但二者間未呈現(xiàn)出顯著差異，表明長(zhǎng)效植入劑與普通注射劑具有相同的免疫調(diào)節(jié)作用。在實(shí)驗(yàn)過程中，高劑量的TP5-gel-MS組和TP5-IP組大鼠并未出現(xiàn)動(dòng)物死亡的情況，提示TP5長(zhǎng)效