上海地區(qū)兒童手足口病流行與病原特征研究.pdf

1、手足口病(hand-foot-and-mouth disease，HFMD)是一種常見于兒童的，以發(fā)熱和手、足、口腔等部位的皮疹、皰疹或皰疹性咽峽炎為主要特征的急性傳染病。少數(shù)患者可并發(fā)無菌性腦膜炎、腦干腦炎、神經(jīng)源性肺水腫、急性遲緩性麻痹和心肌炎等。引起手足口病的病原體主要為腸道病毒，包括埃可病毒(Echo viruses)、柯薩奇病毒(Coxsachievirus)A組（4、5、9、10、16型）和B組（2、5型）、腸道病毒71型(

2、Enterovirus71，EV71)，其中以EV71和CoxA16最多見。EV71因其可引起中樞神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，有較高的病死率和致殘率，嚴重危害兒童生命健康，日益引起人們的普遍關(guān)注。手足口病是全球性的傳染病，進入20世紀90年代以來，EV71逐漸成為全球手足口病的主要病原體，特別是在亞太地區(qū)均有EV71型手足口病流行的報道。2008年，在我國安徽省阜陽市爆發(fā)大規(guī)模的手足口病疫情，累計病例達9446例[1]。2008年5月2日，我國將手

3、足口病納入丙類法定傳染病進行管理。手足口病傳染性強、傳播途徑復雜，人群對EV71普遍易感，4歲以下學齡前兒童是本病的易感人群，在EV71流行期間，幼兒園、托兒所常可發(fā)生集體感染。EV71型手足口病屬急性自限性疾病，感染后可獲得特異性免疫力，對同型病毒可產(chǎn)生持久免疫，保護機體免受再次感染。由于EV71病毒沒有包膜，所以對乙醚、脫氧膽酸鹽、去污劑、普通消毒劑以及弱酸有一定的抵抗性，有機物對病毒有保護作用，EV71在糞便和污水中可存活數(shù)月[2

4、]，使得EV71在人際間傳播的潛在危險性增大。由于目前尚無特效抗病毒藥物和特異性的治療手段，各類疫苗也尚在臨床試驗階段，因此通過采取控制傳染源、阻斷傳播途徑的防控措施對控制手足口病的流行至關(guān)重要。
　　本研究主要針對上海地區(qū)兒童重癥手足口病的流行特征及病原分布、糞便和咽拭配對標本的EV71檢出情況、輕重癥手足口病病例EV71分離株的全基因組特征、EV71外界生存能力、學齡前兒童對EV71的易感進行研究，并對看護點兒童手足口病防控措

5、施進行初探，主要包括以下五個部分:
　　1.2011年上海地區(qū)兒童重癥手足口病流行特征及病原檢出情況分析:
　　對2011年上海市閔行區(qū)兒童重癥手足口病的流行特征、病原分布以及不同病程重癥手足口病病例糞便和咽拭配對標本的病原檢出情況進行分析發(fā)現(xiàn)，2011年上海市閔行區(qū)共報告重癥手足口病例364例，主要集中在1～3歲兒童，占總病例數(shù)的65.93％，尤以1歲組兒童人數(shù)最多占40.38％，此后隨著年齡增加病例數(shù)依次減少，且散居兒童

6、人數(shù)最多占78.88％;男女性別之比為1.98∶1;重癥病例有明顯的時間分布，5～7月為發(fā)病高峰占46.43％，11月出現(xiàn)一個次高峰;多數(shù)重癥病例有病前1周可疑的流行病學接觸史。364名重癥手足口病病例的病原學檢測結(jié)果顯示，重癥病例多由EV71感染引起。114例EV71感染的重癥手足口病病例的糞便和咽拭配對標本檢測結(jié)果顯示，糞便標本EV71檢出率(98.25％)高于咽拭標本(50.00％);患者病后隨著時間的推移，糞便和咽拭標本的檢出率

7、均有所下降，但在發(fā)病后第14天仍可檢出EV71，發(fā)病后8～14天咽拭標本的EV71檢出率仍可達47.37％。研究結(jié)果表明，2011年上海市閔行區(qū)重癥手足口病病例有明顯的時間、人群分布;重癥病例糞便標本EV71檢出率高于咽拭，采集糞便標本對疾病的病原學診斷更有意義;病后兩周咽拭標本仍有較高的檢出率，提示雖然糞口途徑是手足口病傳播的主要方式，但EV71通過呼吸道傳播也不容忽視。
　　2.2012年上海地區(qū)健康嬰幼兒EV71血清學研究:

8、
　　為了解上海地區(qū)健康嬰幼兒對EV71的自然感染狀況及不同年齡、性別嬰幼兒對EV71的易感性，探討不同月齡嬰幼兒血清EV71中和抗體的流行趨勢。對2012年6～8月采集的上海地區(qū)449份0～4歲健康嬰幼兒血清標本，進行微量細胞病變法檢測血清EV71中和抗體。結(jié)果顯示，449份健康嬰幼兒血清EV71中和抗體陽性率為43.65％(196/449)，中和抗體幾何平均滴度(GMT)為1∶10.43。不同性別嬰幼兒的血清中和抗體陽性率差異

9、無統(tǒng)計學意義。血清EV71中和抗體水平與年齡有密切關(guān)聯(lián)，隨著年齡的增長，中和抗體水平呈先下降后上升的趨勢。小于1月的新生兒，其血清EV71中和抗體水平最高，抗體陽性率高達100.00％，GMT為1∶60.41，隨著月齡增加，中和抗體水平逐漸降低，5個月后嬰兒血清EV71中和抗體水平急劇下降，9～11月時血清EV71抗體陽性率處于最低水平，陽性率僅為10.00％，11月后嬰幼兒血清抗體水平開始逐漸升高，～48月齡組幼兒血清EV71中和抗體

10、陽性率可達66.67％，GMT為1∶20.87。結(jié)果提示5月～3歲的嬰幼兒是手足口病的易感人群。
　　3.2011年上海地區(qū)輕、重癥手足口病患兒EV71分離株全基因組特征分析:為探討EV71基因序列的改變與臨床結(jié)局的關(guān)系，對來自2011年重癥與輕癥手足口病患兒的各5株EV71分離株進行全基因組序列的RT-PCR擴增、測序及拼接，并與美國國立生物技術(shù)信息中心(NCBI)公布的EV71 A、B、C基因型代表株進行核苷酸、氨基酸比對和系

11、統(tǒng)進化分析。結(jié)果顯示10株EV71分離株基因全長均為7406bp;輕、重癥手足口病患兒EV71分離株高度同源，5'UTR和3'UTR區(qū)核苷酸同源性分別為96.7％～99.0％、96.2％～100.0％，P1區(qū)、P2區(qū)、P3區(qū)的核苷酸同源性/氨基酸同源性分別為95.9％～96.9％/99.1％～99.9％、95.4％～97.3％/96.5％～100.0％、95.1％～97.4％/96.2％～99.7％;輕、重癥患兒EV71分離株與C4基因

12、亞型代表株有最高的核苷酸及氨基酸同源性，重癥分離株與其在VP1～VP4區(qū)核苷酸/氨基酸同源性分別為97.0％～98.5％/99.3％～100.0％、97.7％～98.3％/99.6％～100.0％、97.3％～98.2％/99.2％～100.0％、96.0％～99.5％/98.5％～100.0％，輕癥分離株與其在VP1～VP4區(qū)核苷酸/氨基酸同源性分別為98.2％～98.5％/99.3％～100.0％、97.7％～98.4％/100.0

13、％、97.3％～98.0％/99.6％～100.0％、96.5％～99.0％/100.0％;在系統(tǒng)發(fā)生樹上，2011年上海地區(qū)5例輕癥和5例重癥手足口病患兒EV71分離株均屬C基因型的C4亞型。重癥患兒EV71分離株在非編碼區(qū)出現(xiàn)9個位點的明顯堿基突變，在編碼區(qū)重癥分離株共發(fā)生22個位點的氨基酸突變，其中3例重癥分離株在5個氨基酸位點VP1區(qū)(N282S)、VP4區(qū)(T7A)、P2區(qū)(D85E)、3C區(qū)(V56I)和3D區(qū)(S37N)同

14、時發(fā)生變異。
　　4.不同介質(zhì)表面EV71在不同氣候中存活能力研究:
　　為分析介質(zhì)表面污染的EV71在不同溫、濕度條件下的存活能力，以探討外環(huán)境中EV71傳播的潛在危險。將1×105 TCID50病毒量的EV71均勻滴加在滅菌的塑料、木塊和布片三種介質(zhì)表面，置入模擬四種不同溫、濕度氣候條件的實驗室人工氣候箱中，一定時間后回收介質(zhì)表面病毒，回收液接種Vero細胞，觀察致細胞病變效應(CPE)，每日監(jiān)測不同氣候條件下介質(zhì)表面E

15、V71存活情況。結(jié)果顯示，介質(zhì)表面污染的EV71存活時間受溫、濕度氣候條件影響，20℃、濕度80％的氣候條件下病毒存活時間最長，模擬的四種氣候條件中，溫度低、濕度高的條件利于EV71的存活;在同一氣候條件下，不同介質(zhì)表面污染的EV71存活時間受介質(zhì)材質(zhì)影響，EV71在布片、木塊天然材質(zhì)中的存活能力強于合成材質(zhì)塑料。
　　5.看護點兒童手足口病防控措施的初探:
　　2012年4月1日到6月30日，在上海市閔行區(qū)華漕鎮(zhèn)全部16家

16、看護點(1918名兒童)進行手足口病防控措施的初探，將所有看護點分為防控組和對照組，對照和防控組各8家，其中防控組687名兒童，對照組1231名兒童，在防控組采取包括嚴格晨檢、缺勤登記、手及環(huán)境物表消毒等在內(nèi)的防控措施，對照組仍進行其常規(guī)防控工作，防控實施3個月后比較兩組手足口病的發(fā)病情況。結(jié)果顯示，在3個月的防控實施期內(nèi)，對照組發(fā)生7起手足口病疫情，其中2起為聚集性疫情，而防控組共發(fā)生3起，1起為聚集性疫情;4歲及以下年齡段的兩組兒童