雨生紅球藻中蝦青素的分離提取及其性質(zhì)的研究.pdf

1、蝦青素是一種具有強抗氧化作用的類胡蘿卜素。本文以雨生紅球藻藻粉為原料，建立了分析測定蝦青素的方法，優(yōu)化了常規(guī)溶劑提取、微波提取、超聲波提取以蝦青素酯為主的粗色素油的工藝條件，采用響應面法優(yōu)化了蝦青素酯的皂化條件，利用大孔樹脂和硅膠柱層析對蝦青素提取物進行了除堿和分離純化，研究了Cu2+、微波、超聲波對反式蝦青素穩(wěn)定性的影響以及皂化前后的提取物的抗氧化活性。實驗結果如下： 1.建立了分析測定雨生紅球藻中蝦青素的薄層色譜法、分光光度

2、法、高效液相色譜法。薄層色譜法用于分離雨生紅球藻中的蝦青素合適的展開劑為正己烷:丙酮=7:3，展開時間為10min；分光光度法測定乙酸乙酯和乙醇的混合溶劑提取的粗色素油的測定波長為472nm，加樣回收率為101.97％～104.69％，RSD為0.91％～2.09％；高效液相色譜法的條件為：KromasilC18柱(250×4.6mm)，流動相為二氯甲烷:甲醇:乙腈:水=5:85:5:5，檢測波長480nm，流速1mL/min，柱溫25

3、℃，進樣量20μL，該方法回收率為99.69％～102.60％，RSD為0.14％～0.49％。 2.確定了體積比為1:2的乙酸乙酯和乙醇為提取雨生紅球藻中蝦青素的適宜溶劑；對常規(guī)溶劑提取、微波提取、超聲波提取蝦青素酯為主的粗色素油的條件進行了優(yōu)化。常規(guī)溶劑提取法的最佳條件為：溫度為25℃、提取次數(shù)為2次，提取時間為6h、固液比為1:60(g/mL)；微波提取的最佳條件為：功率為141W、提取時間為83sec、固液比為1:50(

4、g/mL)，提取次數(shù)為4次；超聲波提取的最佳條件為：功率為163W、提取時間為3min、固液比為1:35(g/mL)，提取次數(shù)為4次。與常規(guī)溶劑提取相比，微波提取法耗時短、提取量高，適合于雨生紅球藻中蝦青素的提取，而超聲波法在這種色素的提取上沒有表現(xiàn)出自身的優(yōu)越性。 3.4℃下的最佳皂化條件為：皂化時間11.45h、粗色素油濃度6.19mg/ml、KOH的濃度0.045M，加熱條件下蝦青素酯的最佳皂化條件為：粗色素油濃度4.56

5、mg/mL、堿的濃度0.054M、皂化溫度30℃，皂化時間20min。兩種優(yōu)化條件下得到的游離蝦青素的量之間無顯著性差異(P＞0.05)。 4.采用HPD100型吸附樹脂吸附，經(jīng)過水-乙醇-丙酮分步洗脫，可以達到除堿和初步純化的目的，再用ZCX-Ⅱ型硅膠作為固定相，用正己烷-正己烷:丙酮(7:3，V/V)-丙酮分步洗脫，收集液真空濃縮后，可以得到含游離蝦青素8.3％的膏狀提取物。 5.研究了化學因素(Cu2+)和物理因素

6、(微波、超聲波)對反式蝦青素穩(wěn)定性的影響。人體必需的微量元素之一銅和微波、超聲波這兩種常用的輔助提取方法都降低了反式蝦青素的穩(wěn)定性，Cu2+和微波處理使反式蝦青素發(fā)生了異構化。與Cu2+和微波處理不同，超聲波處理并沒有導致順式異構體的產(chǎn)生，很可能將反式蝦青素降解成其它無色的化合物，它們在294nm和324nm附近有吸收。 6.雨生紅球藻提取物皂化前后都具有抑制亞油酸氧化、清除DPPH自由基、還原三價鐵離子、抑制LOX酶活性的能力