HOXA10基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化及蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥關(guān)系的研究.pdf

1、目的：通過檢測子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）患者在位、異位內(nèi)膜組織中HOXA10基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況及HOXA10 蛋白表達(dá)水平，探討HOXA10 基因甲基化和蛋白表達(dá)與子宮內(nèi)膜異位癥發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系，并為HOXA10 作為靶點(diǎn)進(jìn)行子宮內(nèi)膜異位癥基因治療提供理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　 方法：研究對(duì)象為36 例EMs 患者的異位內(nèi)膜、在位子宮內(nèi)膜組織，并以15例無EMs 的正常子宮內(nèi)膜作為對(duì)照組，采用北京天根生化技術(shù)有限公司的基因組D

2、NA 提取試劑盒（TIANamp Genomic DNA Kit）提取組織DNA，并對(duì)組織DNA進(jìn)行亞硫酸氫鹽修飾、純化后作為模板，應(yīng)用甲基化特異性聚合酶鏈反應(yīng)法（MSP) 檢測HOXA10 基因啟動(dòng)子區(qū)甲基化狀況，采用免疫組織化學(xué)染色法(SP 法)檢測EMs 中異位內(nèi)膜、在位內(nèi)膜組織及對(duì)照組標(biāo)本中HOXA10 蛋白表達(dá)情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果采用SPSS16.0 統(tǒng)計(jì)軟件處理，基因頻率采用直接計(jì)數(shù)法，各組間率的比較采用χ2 檢驗(yàn)和Fisher′

3、s 精確概率法和非參數(shù)秩合檢驗(yàn). 基因蛋白表達(dá)與甲基化之間的相關(guān)性采用Spearman 等級(jí)相關(guān)分析，檢驗(yàn)顯著性標(biāo)準(zhǔn)取α=0.05，P≤0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：
　　 ⑴36例EMs患者的異位內(nèi)膜組織中HOXA10基因啟動(dòng)子區(qū)CpG島甲基化率為33.3％(12/36)；其相應(yīng)的在位內(nèi)膜甲基化率為19.4％(7/36)；15例對(duì)照組子宮內(nèi)膜組織中HOXA10基因均未發(fā)生甲基化；三組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；

4、
　　 ⑵HOXA10在三組內(nèi)膜的腺上皮和間質(zhì)細(xì)胞中均有表達(dá)，對(duì)照組子宮內(nèi)膜表達(dá)強(qiáng)度隨月經(jīng)周期存在時(shí)空的特異性，分泌中、晚期明顯高于增生期和分泌早期；而EMs患者在位內(nèi)膜、異位內(nèi)膜中HOXA10蛋白表達(dá)下降，無明顯的分泌中、晚期峰，異位內(nèi)膜間質(zhì)細(xì)胞HOXA10的表達(dá)下降明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 ⑶12例異位內(nèi)膜組織中HOXA10基因啟動(dòng)子發(fā)生異常甲基化均發(fā)生在臨床III～I(xiàn)V期患者，臨床I～I(xiàn)I期未發(fā)生甲基化；HO

5、XA10在I～I(xiàn)V期異位內(nèi)膜組表達(dá)有差異，組間比較IV期低于I期、II期和III期，而其在位內(nèi)膜HOXA10表達(dá)水平在I～I(xiàn)V期患者之間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；
　　 ⑷異位內(nèi)膜組織HOXA10的蛋白表達(dá)與HOXA10基因啟動(dòng)子甲基化具有負(fù)相關(guān)性。
　　 結(jié)論： EMs 患者異位內(nèi)膜組織中存在HOXA10 基因啟動(dòng)子區(qū)異常甲基化，其基因表達(dá)普遍下調(diào)或缺失，且與EMs 的臨床分期相關(guān)。提示HOXA10 基因啟動(dòng)子甲基化在EMs