B淋巴細(xì)胞在多發(fā)性硬化和視神經(jīng)脊髓炎發(fā)病中作用的初步探討.pdf

1、多發(fā)性硬化(Multiple sclerosis，MS)是一種發(fā)病機(jī)制未明的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病，目前多認(rèn)為是一種遺傳、環(huán)境和病毒感染等多因素起源的髓鞘反應(yīng)性CD4+T細(xì)胞介導(dǎo)的自身免疫性疾病。近期多項(xiàng)研究提示我們B淋巴細(xì)胞在MS的發(fā)病中也起著重要的復(fù)雜的作用，但其具體作用機(jī)制還不明確。
　　 視神經(jīng)脊髓炎(Neuromyelitis optica，NMO)也是一種嚴(yán)重的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病，目前認(rèn)為該病是主要針對星型膠

2、質(zhì)細(xì)胞膜上水通道蛋白-4(water channel aquaporin-4，AQP4)的一種抗體介導(dǎo)的自身免疫性疾病，是不同于MS的另一類疾病譜。B淋巴細(xì)胞在該病的發(fā)病中起著至關(guān)重要的作用。
　　 B細(xì)胞活化因子(B cell activating factor，BAFF)和增殖誘導(dǎo)配體(Proliferation-Inducing Ligand，APRIL)是兩種主要的B淋巴細(xì)胞生存、增殖、分化相關(guān)的細(xì)胞因子。他們在維持炎癥

3、性B淋巴細(xì)胞反應(yīng)的過程中扮演著重要的角色，但是在MS和NMO的發(fā)病中B淋巴細(xì)胞的調(diào)節(jié)的作用尚未明確。
　　 在B淋巴細(xì)胞增殖分化的過程中，初始B細(xì)胞、記憶性B細(xì)胞、漿母細(xì)胞、抗體分泌性漿細(xì)胞在調(diào)節(jié)正常免疫狀態(tài)中起著重要作用，其功能異?？赡軐?dǎo)致自身免疫行性疾病發(fā)生。目前的研究尚未能闡明B譜系細(xì)胞在MS和NMO的發(fā)病和疾病狀態(tài)的維持等方面的作用。
　　 本研究以常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘性疾病——MS和NMO為研究目標(biāo)，以中國

4、南方多發(fā)性硬化和視神經(jīng)脊髓炎人群為研究對象，比較分析了急性復(fù)發(fā)期、緩解期和糖皮質(zhì)激素治療前后MS和NMO患者外周血B淋巴細(xì)胞亞群的比例變化，比較MS和NMO患者在急性復(fù)發(fā)期外周血和腦脊液中B淋巴細(xì)胞亞群組成的差異，比較血清中BAFF和APRIL的水平，以期證實(shí)在MS和NMO的發(fā)病過程中B淋巴細(xì)胞起著重要作用，為MS和NMO的治療提供理論依據(jù)，同時(shí)探討外周血B淋巴細(xì)胞亞群結(jié)構(gòu)變化和BAFF/APRIL的變化是否能為疾病的療效評估和預(yù)后提供

5、實(shí)驗(yàn)室證據(jù)。
　　 第一部分 MS和NMO患者外周血和腦脊液B淋巴細(xì)胞亞群分析
　　 1目的：
　　 研究外周血和腦脊液中B淋巴細(xì)胞各亞群在急性復(fù)發(fā)期、緩解期、治療前后MS、NMO患者和正常人群的差異，了解B淋巴細(xì)胞在MS和NMO疾病過程中的變化，分析是哪一些亞群細(xì)胞在這些疾病發(fā)病中起著主導(dǎo)作用。
　　 2方法：
　　 2.1以急性復(fù)發(fā)期MS(n=18)和NMO(n=20)患者、緩解期MS(n=8

6、)和NMO(n=6)患者、急性期甲基強(qiáng)的松龍沖擊治療前、后的MS(n=8)和NMO(n=8)患者和正常人(n=14)外周血和急性復(fù)發(fā)期MS(n=7)NMO(n=10)患者腦脊液為研究對象。
　　 2.2采集外周靜脈血和腰穿收取腦脊液，使用CD138、CD38、CD19、CD27單克隆熒光抗體進(jìn)行細(xì)胞表面染色，檢測CD19+、CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+和CD19-/CD138+的B細(xì)胞各個(gè)亞群比例并

7、進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 3結(jié)果：
　　 3.1急性復(fù)發(fā)期MS患者和NMO患者外周血CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+細(xì)胞亞群均顯著高于正常人，未能檢測到CD19-/CD138+細(xì)胞亞群，可以檢測到CD38高表達(dá)的B細(xì)胞亞群，表現(xiàn)為CD19+/CD27+/CD38high。
　　 3.2緩解期MS患者較急性復(fù)發(fā)期患者外周血CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+細(xì)胞亞群比例顯

8、著下降，而緩解期NMO患者較急性復(fù)發(fā)期患者各細(xì)胞亞群比例雖然均有下降，但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。緩解期兩組患者外周血CD19+/CD38high細(xì)胞亞群比例較急性復(fù)發(fā)期患者均明顯下降。
　　 3.3糖皮質(zhì)激素沖擊治療后MS患者和NMO患EDSS評分顯著下降，但兩組患者外周血CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+細(xì)胞亞群比例在治療前后無顯著差異。CD19+/CD38high細(xì)胞比例在治療后均下降，但未進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分

9、析。
　　 3.4急性復(fù)發(fā)期MS和NMO患者腦脊液中CD19+/CD27+、CD19+/CD27+/CD38+比例均明顯升高，比外周血相應(yīng)細(xì)胞亞群所占比例更大，但是差異沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。腦脊液中可以檢測到CD19-/CD138+細(xì)胞亞群，未作統(tǒng)計(jì)分析。MS和NMO患者腦脊液中均可檢測到CD19+/CD38high細(xì)胞，與MS患者頭顱MRI上的T2序列病灶數(shù)量呈正相關(guān)，并且在NMO患者腦脊液中該群細(xì)胞比例顯著高于外周血。
　　

10、 4結(jié)論：
　　 急性復(fù)發(fā)期MS和NMO患者記憶性B淋巴細(xì)胞(CD19+/CD27+)和漿母細(xì)胞(CD19+/CD27+/CD38+)亞群占外周血和腦脊液中B淋巴細(xì)胞的比例顯著升高，并出現(xiàn)CD38high細(xì)胞群。MS緩解期外周血相應(yīng)活化的B細(xì)胞比例減少，顯示在疾病急性期B細(xì)胞反應(yīng)增強(qiáng)，活化的B淋巴細(xì)胞亞群出現(xiàn)增量表達(dá)，參與了其發(fā)病，可能與疾病的活動(dòng)程度相關(guān)。而NMO在緩解期B細(xì)胞活化程度與急性期無顯著差異，符合NMO的疾病特點(diǎn)

11、。急性復(fù)發(fā)期無論是MS還是NMO患者，腦脊液中和外周血中的記憶性B細(xì)胞和漿母細(xì)胞增高的程度基本一致，顯示外周血B細(xì)胞亞群比例的變化，一定程度上可以反映CSF的B細(xì)胞增殖情況。
　　 第二部分急性復(fù)發(fā)期MS和NMO患者血清BAFF和APRIL水平的研究
　　 1目的：
　　 研究急性復(fù)發(fā)期MS和NMO患者血清BAFF和APRIL水平，探討其變化是否與外周血B淋巴細(xì)胞亞群比例的變化一致，是否能為疾病的療效評估和預(yù)后提

12、供實(shí)驗(yàn)室依據(jù)。
　　 2方法：
　　 2.1以急性復(fù)發(fā)期MS(n=16)患者、NMO(n=30)患者和正常人(n=12)為研究對象，采取外周靜脈血，采用ELISA方法檢測血清中BAFF和APRIL濃度并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　 3結(jié)果：
　　 3.1急性復(fù)發(fā)期MS和NMO患者血清中BAFF水平較正常對照組升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MS和NMO患者血清BAFF水平的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.2急性

13、復(fù)發(fā)期MS和NMO患者血清中APRIL水平較正常對照組升高，但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；MS和NMO患者血清APRIL水平的差異也無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 3.3對急性復(fù)發(fā)期MS和NMO患者血清BAFF和APRIL水平和EDSS評分值進(jìn)行相關(guān)分析，結(jié)果顯示血清BAFF和APRIL水平與MS和NMO組的EDSS評分均無明顯相關(guān)性。
　　 4結(jié)論：
　　 急性復(fù)發(fā)期MS患者和NMO患者血清中BAFF和APRIL水平與正常人無顯著