灰樹(shù)花化學(xué)成分及抗腫瘤細(xì)胞增殖作用研究.pdf

1、灰樹(shù)花（Grifola frondosa）是一種珍貴的食藥兩用菌，屬擔(dān)子菌亞門(mén)，層菌綱，非褶菌目，多孔菌科，樹(shù)花菌屬真菌。有抗腫瘤、提高免疫力、降血糖、抗病毒、抗輻射、清除自由基等功效?；覙?shù)花巾已知的化學(xué)成分主要包括多糖、核酸、多酚、氨基酸、微量元素等，對(duì)灰樹(shù)花中的小分子化合物儀報(bào)道過(guò)粗多酚，由于未進(jìn)行充分的純化，無(wú)法全面了解化合物的類型、含量及它們與灰樹(shù)花藥理作用的關(guān)系。
　　 本文對(duì)灰樹(shù)花小分子化合物進(jìn)行了深入的分離、純化并

2、對(duì)獲得的化合物進(jìn)行化學(xué)結(jié)構(gòu)研究和抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用的測(cè)定。值得指出的是，我們發(fā)現(xiàn)5，8-位存在過(guò)氧鍵對(duì)抑制腫瘤細(xì)胞增殖作用很重要，該結(jié)果為抗癌先導(dǎo)化合物的修飾積累了經(jīng)驗(yàn)，以加快抗癌新藥研發(fā)的速度。
　　 本論文運(yùn)用一種新型高效的天然產(chǎn)物檢識(shí)方法對(duì)灰樹(shù)花依次對(duì)水相、乙醇相、石油醚相進(jìn)行了系統(tǒng)檢識(shí)，結(jié)果表明，水相中含有三萜皂苷；乙醇相含有生物堿、萜類內(nèi)酯、香豆素、有機(jī)酸、黃酮、甾體、三萜類物質(zhì)；石油醚相含有甾體和三萜類物質(zhì)。

3、>　　 灰樹(shù)花分別用95％乙醇提取、乙酸乙酯萃取、硅膠柱層析，得到13個(gè)組分。運(yùn)用MTT比色法，以人乳腺癌細(xì)胞MCF-7模型進(jìn)行篩選，逐級(jí)活性追蹤，最終追蹤到隱藏在上千種化合物中的活性日標(biāo)物。使用新型微量重結(jié)晶法純化，得到了三個(gè)化合物。用lHNMR、13CNMR核磁共振等波譜學(xué)方法鑒定了3個(gè)甾醇類化合物的結(jié)構(gòu)，分別為：5a，8β-過(guò)氧麥角甾-6，22-一烯-3β-醇、麥角甾醇3β，5a，6β-三羥基麥角甾醇。
　　 運(yùn)用MTT

4、比色法、流式細(xì)胞術(shù)研究它們對(duì)MCF-7細(xì)胞增殖的影響，發(fā)現(xiàn)三種化合物具有不同程度的抑制作用。5a，8β-過(guò)氧麥角甾-6，22E-二烯-3β-醇能明顯MCF-7增殖，且有明顯的促凋亡作用；麥角甾醇和3β，5a，6β-三羥基麥角甾醇輕微抑制MCF-7增殖。
　　 化合物I、II、Ⅲ的結(jié)構(gòu)極相似，因此進(jìn)行構(gòu)效分析，尋找起抗癌作用的關(guān)鍵基團(tuán)，結(jié)果表明，5，8-位含有過(guò)氧鍵對(duì)麥角甾醇類物質(zhì)具有抑制MCF-7增殖作用是極其重要的。
　

5、　 綜上所述，本文的主要結(jié)果如下
　　 l、首次提出灰樹(shù)花中含有香豆素、萜類內(nèi)酯、黃酮、有機(jī)酸、生物堿、甾體、三萜等多種天然物質(zhì)，對(duì)灰樹(shù)花中含有的小分子物質(zhì)有了全面系統(tǒng)的認(rèn)識(shí)，為深度開(kāi)發(fā)利用灰樹(shù)花打下了基礎(chǔ)。
　　 2、首次從灰樹(shù)花中純化得到以下三種化合物：5a，8β-過(guò)氧麥角甾-6，22E-二烯-3β-醇，麥角甾醇和3β，5α，6β-三羥基麥角甾醇，對(duì)灰樹(shù)花的化學(xué)成分有了更深入的了解。
　　 3、5β8β-過(guò)

6、氧麥角甾-6，22-二烯-3β-醇有明顯抑制MCF-7增殖的作用，并有明顯的促凋亡作用，麥角甾醇和3β，5a，6β-三羥基麥角甾醇有輕微抑制其增殖的作用。
　　 4、通過(guò)效分析，5，8-位存在過(guò)氧鍵對(duì)麥角甾醇類物質(zhì)具有抑制MCF-7增殖作用重要，為抗痛藥研發(fā)過(guò)程中的關(guān)鍵步驟即抗痛先導(dǎo)化合物的化學(xué)修飾積累經(jīng)驗(yàn)。
　　 5、改進(jìn)了天然產(chǎn)物的檢識(shí)方法，大幅降低了檢識(shí)過(guò)程巾的假陽(yáng)性和假陰性率；改進(jìn)了傳統(tǒng)重結(jié)晶法，可實(shí)現(xiàn)毫克級(jí)樣品