版權(quán)說明:本文檔由用戶提供并上傳,收益歸屬內(nèi)容提供方,若內(nèi)容存在侵權(quán),請進行舉報或認領(lǐng)
文檔簡介
1、專一性微生物脫硫技術(shù)能選擇地性脫除加氫脫硫技術(shù)難以脫除的芳香族含硫化合物,是實現(xiàn)石油及其產(chǎn)品深度脫硫有效的技術(shù)之一。分離篩選優(yōu)良的菌株,構(gòu)建高效的脫硫工程菌是提高微生物脫硫能力的重要途徑。本文以此為研究目標,開展了專一性脫硫菌株的分離鑒定、脫硫基因克隆、啟動子功能鑒定、表達載體和工程菌的構(gòu)建以及脫硫活性評估等方面的研究。 采用以二苯并噻吩(DBT)為唯一硫源的培養(yǎng)基,經(jīng)馴化培養(yǎng),從我國山東勝利油田土樣中分離到一株專一性脫硫菌株L
2、Y822。對該菌培養(yǎng)五天后的代謝產(chǎn)物高效液相色譜(HPLC)分析的結(jié)果表明,0.5mmol/L的DBT完全轉(zhuǎn)化為2-羥基聯(lián)苯(2-HBP),證明該菌株是“4S途徑”的專一性脫硫菌。菌株形態(tài)特征及16SrDNA序列分析表明,該菌屬于紅球菌屬進化分枝,與紅平紅球菌Rhodococcuserythropolis同源性最高,達到99.7%,故將該菌初步鑒定為Rhodococcussp.LY822。以LY822菌的質(zhì)粒DNA為模板,PCR反應(yīng)擴增
3、了三個脫硫結(jié)構(gòu)基因片段dszA、dszB和dszC,大小分別為1.3kb、1.0kb和1.2kb。利用表達質(zhì)粒pET21a分別克隆了三個脫硫基因,并在大腸桿菌BL21(DE3)中誘導(dǎo)表達,全細胞蛋白電泳分析發(fā)現(xiàn)有相應(yīng)的清晰融合蛋白條帶產(chǎn)生。 以帶有報告基因gfp的質(zhì)粒pEGH和大腸桿菌-紅球菌穿梭載體pBS305為出發(fā)質(zhì)粒,構(gòu)建了三個帶有不同啟動子的表達質(zhì)粒pBSGt、pBSGd和pBSGk,電擊轉(zhuǎn)化紅平紅球菌LY822。激光共
4、聚焦顯微鏡檢測結(jié)果表明,當(dāng)gfp基因受tsr(硫鏈絲菌肽抗性基因)啟動子調(diào)控時,gfp基因的表達效率最高,而且不再受硫酸鹽的抑制。 以紅平紅球菌LY822的質(zhì)粒為模板,擴增了脫硫基因的全片段,連接于經(jīng)HindⅢ-XbaⅠ酶切的pBSGd,pBSGk,pBSGt,得到帶有脫硫基因的表達載體pBSDd、pBSDt和pBSDk。分別電擊轉(zhuǎn)化LY822菌和吖啶橙消除質(zhì)粒的LY-0菌,脫硫活性測定結(jié)果表明,tsr啟動子調(diào)控的工程菌株LYD
溫馨提示
- 1. 本站所有資源如無特殊說明,都需要本地電腦安裝OFFICE2007和PDF閱讀器。圖紙軟件為CAD,CAXA,PROE,UG,SolidWorks等.壓縮文件請下載最新的WinRAR軟件解壓。
- 2. 本站的文檔不包含任何第三方提供的附件圖紙等,如果需要附件,請聯(lián)系上傳者。文件的所有權(quán)益歸上傳用戶所有。
- 3. 本站RAR壓縮包中若帶圖紙,網(wǎng)頁內(nèi)容里面會有圖紙預(yù)覽,若沒有圖紙預(yù)覽就沒有圖紙。
- 4. 未經(jīng)權(quán)益所有人同意不得將文件中的內(nèi)容挪作商業(yè)或盈利用途。
- 5. 眾賞文庫僅提供信息存儲空間,僅對用戶上傳內(nèi)容的表現(xiàn)方式做保護處理,對用戶上傳分享的文檔內(nèi)容本身不做任何修改或編輯,并不能對任何下載內(nèi)容負責(zé)。
- 6. 下載文件中如有侵權(quán)或不適當(dāng)內(nèi)容,請與我們聯(lián)系,我們立即糾正。
- 7. 本站不保證下載資源的準確性、安全性和完整性, 同時也不承擔(dān)用戶因使用這些下載資源對自己和他人造成任何形式的傷害或損失。
最新文檔
- 專一性脫有機硫菌的篩選及其脫硫活性的研究.pdf
- 絮凝性基因工程菌的構(gòu)建及絮凝劑產(chǎn)生菌的篩選.pdf
- 中性植酸酶產(chǎn)生菌的篩選及基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 高效絮凝性基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 生物柴油基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 產(chǎn)烷烴基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 產(chǎn)PuFAs土壤真菌篩選及EPA基因工程菌構(gòu)建.pdf
- 富馬酸基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 乙醛酸基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 促凍殺蟲基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 自養(yǎng)硝化細菌的分離、鑒定及norB基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 產(chǎn)赤蘚糖醇基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 54423.蘇氨酸基因工程菌的構(gòu)建
- 絮凝性釀酒酵母基因工程菌的構(gòu)建與發(fā)酵.pdf
- 石油微生物基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 產(chǎn)奎尼酸基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- γ-癸內(nèi)酯高產(chǎn)酵母基因工程菌的構(gòu)建.pdf
- 莽草酸基因工程菌構(gòu)建的初步研究.pdf
- 木糖發(fā)酵產(chǎn)乙醇尖孢鐮刀菌篩選和基因工程菌構(gòu)建.pdf
- 53081.高效滅蝗基因工程菌的構(gòu)建
評論
0/150
提交評論