過(guò)表達(dá)BRCC36蛋白對(duì)慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌重構(gòu)的影響及機(jī)制.pdf

1、目的:
　　探討B(tài)RCC36蛋白在慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的小鼠心肌肥大和纖維化中的作用及其可能作用機(jī)制。
　　方法:
　　1)利用商業(yè)服務(wù)構(gòu)建心臟特異性過(guò)表達(dá)BRCC36的轉(zhuǎn)基因小鼠(a-MHC-BRCC36)，并進(jìn)行鑒定。
　　2)轉(zhuǎn)基因動(dòng)物完成后，通過(guò)在右無(wú)名動(dòng)脈和左側(cè)頸總動(dòng)脈之間部分縮窄主動(dòng)脈弓(TAC)而誘導(dǎo)形成慢性壓力負(fù)荷模型，將制好的模型分為四組:野生型假手術(shù)組、野生型主動(dòng)脈縮窄組、轉(zhuǎn)基因型假手術(shù)組、轉(zhuǎn)基因

2、型主動(dòng)脈縮窄組。
　　3)模型建立8周后，檢測(cè)心肌肥厚程度;將心肌樣本做蘇木素-伊紅染色以及天狼星紅染色;采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)方法檢測(cè)細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)締組織生長(zhǎng)因子（connective tissue growth factor，CTGF）、骨膜蛋白(Periostin)表達(dá)變化;Western blot檢測(cè)p-smad3、γ-H2AX、Rad51蛋白的變化情況。
　　結(jié)果:
　　1)通過(guò)

3、基因鑒定、western blot、Real-time RT-PCR檢測(cè)證實(shí)在基礎(chǔ)狀態(tài)下BRCC36轉(zhuǎn)基因小鼠心臟組織中BRCC36蛋白表達(dá)較野生型小鼠明顯升高。
　　2)在野生型小鼠，TAC手術(shù)組相對(duì)于假手術(shù)組在心臟重量指數(shù)、左心室重量指數(shù)、心肌細(xì)胞直徑均增加，而在BRCC36心臟過(guò)表達(dá)的轉(zhuǎn)基因的小鼠組，TAC誘導(dǎo)的心肌肥厚較野生型小鼠比較明顯減輕。
　　3)天狼星紅染色結(jié)果顯示:天狼星紅染色可見(jiàn)野生型小鼠組TAC手術(shù)組血

4、管周?chē)约靶募￠g質(zhì)膠原沉積明顯多于假手術(shù)組，而B(niǎo)RCC36轉(zhuǎn)基因小鼠組TAC誘導(dǎo)的心肌纖維化程度較野生型小鼠組明顯減輕。
　　4)采用實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈反應(yīng)(Real-time PCR)檢測(cè)結(jié)果顯示:野生型小鼠TAC手術(shù)組相對(duì)于假手術(shù)組心肌組織內(nèi)CTGF、Periostin mRNA的表達(dá)明顯升高(P＜0.05)，而B(niǎo)RCC36轉(zhuǎn)基因的小鼠組，TAC誘導(dǎo)的上述細(xì)胞外基質(zhì)分子表達(dá)水平低于野生型小鼠TAC手術(shù)組(P＜0.05)。

5、　　5) Western blot分析結(jié)果顯示，在野生型小鼠，TAC手術(shù)組相對(duì)于假手術(shù)組心肌組織內(nèi)p-smad3的水平顯著升高，同時(shí)伴有γ-H2AX及Rad51的表達(dá)明顯升高。與野生型TAC比較，轉(zhuǎn)基因小鼠TAC術(shù)后心肌組織內(nèi)smad3的活化得到明顯抑制，同時(shí)顯著降低γ-H2AX蛋白表達(dá)水平，同時(shí)顯著增加Rad51蛋白表達(dá)(P＜0.05)。
　　結(jié)論:
　　心肌特異性過(guò)表達(dá)BRCC36可顯著改善慢性壓力負(fù)荷誘導(dǎo)的心肌肥厚及纖