重組IL-17a對鮑曼不動桿菌膿毒癥大鼠體內(nèi)中性粒細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的：通過研究鮑曼不動桿菌膿毒癥大鼠體內(nèi)中性粒細(xì)胞在不同時間點凋亡的情況，并以兩種不同劑量的重組IL-17a進(jìn)行干預(yù)治療，通過檢測不同時間點中性粒細(xì)胞凋亡率，caspase-3的活性及凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2及Bax蛋白的表達(dá)情況，，血漿中可溶性Fas及炎癥因子IL-17的濃度，并觀察肝肺組織HE染色后的病理變化，探討重組IL-17a對鮑曼不動桿菌中性粒細(xì)胞凋亡的影響并其可能的機(jī)制。
　　方法：1、將90只清潔級健康成年雄性wist

2、ar大鼠隨機(jī)分成9組：正常對照組（N），鮑曼不動桿菌膿毒癥12h、24h組(S12h、S24h），鮑曼不動桿菌膿毒癥+生理鹽水組（S12h+NS、S24h+NS），重組IL-17低劑量治療12h、24h組(S12h+L、S24h+L），重組 IL-17高劑量治療12h、24h組(S12h+H、S24h+H）。正常對照組大鼠腹腔注射等量生理鹽水，而鮑曼不動桿菌膿毒癥各組及干預(yù)治療各組大鼠分別腹腔注射鮑曼不動桿菌懸液；重組 IL-17低劑量

3、高劑量治療各組大鼠尾靜脈分別注射rIL-17a0.001μg、1μg，余各組（鮑曼不動桿菌膿毒癥+生理鹽水組12h,24h），大鼠尾靜脈注射等量生理鹽水。2、正常組、不同時間點鮑曼不動桿菌膿毒癥組及rIL-17a治療組大鼠頸動脈采血后取肝肺組織，用密度梯度離心法提取中性粒細(xì)胞，并分離血漿，通過形態(tài)學(xué)觀察和 DNA片段化的檢測分析其凋亡情況，用AnnexinV-FITC和PI雙染法檢測中性粒細(xì)胞凋亡的變化，用分光光度法檢測中性粒細(xì)胞Cas

4、pase3酶活性，ELISA檢測血漿中炎癥因子IL-17及可溶性Fas含量的變化，蛋白免疫印跡法檢測中性粒細(xì)胞 Bax，Bcl-2蛋白的表達(dá)，HE染色法觀察肝和肺組織病理改變。
　　結(jié)果：1、與正常對照組相比，鮑曼不動桿菌膿毒癥各組中性粒細(xì)胞凋亡率較正常對照組明顯降低（p＜0.05），與其他各組比較，尾靜脈注射膿毒癥大鼠高劑rIL-17相同時間點明顯抑制PMN凋亡（p＜0.05），鮑曼不動桿菌膿毒癥+生理鹽水組與膿毒癥組比較無明顯

5、差異（p＞0.05）；2、中性粒細(xì)胞DNA電泳結(jié)果顯示高劑量IL-1712h,24h出現(xiàn)梯狀電泳圖譜，其他各組DNA電泳條帶均在加樣孔附近；3、與其他各組中性粒細(xì)胞的Caspase3的活性比較，較高劑量 IL-17組12h,24h的caspase-3活性較其他各組均明顯升高（p＜0.05），而較低劑量 IL-17組12h,24h的caspase-3活性較其他組低（p＜0.05），鮑曼不動桿菌膿毒癥+生理鹽水組與膿毒癥組比較Caspase

6、3活性無明顯變化（p＞0.05）；4、各組S-Fas的水平比較，低劑量IL-17組，12h,24h較其他組高（p＜0.05），高劑量IL-17組，12h,24h較其他組低（p＜0.05），鮑曼不動桿菌膿毒癥+生理鹽水組與膿毒癥組比較無明顯差異（p＞0.05）；5、病理切片HE染色可見鮑曼不動桿菌膿毒癥各組肝臟組織炎癥反應(yīng)、細(xì)胞損傷較明顯，低劑量組炎癥反應(yīng)最重，肝細(xì)胞有片狀壞死，而高劑量組則較其減輕，正常對照組未見明顯異常。6、與其它各組

7、比較，中性粒細(xì)胞Westernblot結(jié)果：高劑量IL-17組12h,24h的PMN的Bax蛋白表達(dá)較其他組多（P＜0.05），低劑量IL-17組12h,24h的BAX表達(dá)較其他組少（p＜0.05），而對于PMN的BCL-2的蛋白的表達(dá)，高劑量組12h,24h較其他組低（p＜0.05），低劑量組較其他組高（P＜0.05），鮑曼不動桿菌膿毒癥+生理鹽水組與膿毒癥組比較無明顯差異（p＞0.05）。
　　結(jié)論：1、用重組IL-17a適時