基于ISSRs的安徽省沽油遺傳變異的研究.pdf

1、I摘要省沽油(StaphyleabumaldaDC)是多年生落葉灌木或小喬木，是我國珍稀的特種木本油料樹種。本論文主要包含兩部分的內容：（1）省沽油ISSR-PCR反應體系的建立以及引物的篩選；（2）基于ISSRs的安徽省省沽油資源的遺傳多樣性研究。采用正交試驗設計和單因素分析，建立并優(yōu)化了省沽油的ISSR-PCR反應體系。結果顯示，省沽油ISSR-PCR最適反應體系為模板DNA(5-10ngμL-1)1.0μL、dNTP(10mmol

2、L-1)0.3μL、引物(10μmolL-1)0.5μL、Mg2(25mmolL-1)2.5μL、TaqDNA聚合酶(5UμL-1)0.3μL、10PCR緩沖液2.5μL、HPLC超純水12.9μL，反應體系總體積為20.0ul。PCR擴增程序為:94℃預變性，5min；42個循環(huán):94℃變性45s；54.0～55.3℃退火30s，72℃延伸90s；最后72℃延伸7min，4℃保存。利用上述已建立和優(yōu)化的ISSR-PCR反應體系，從80

3、條ISSR引物中篩選出條帶清晰、多態(tài)性高、穩(wěn)定性好的引物共14條。利用ISSR分子標記技術，對安徽省6個省沽油居群共138個樣本樹木在221個多態(tài)性位點上進行了遺傳多樣性分析。結果表明，在物種水平上，省沽油多態(tài)性位點百分率PPLS=100.00%，有效等位基因數(shù)nes=1.210，Nei，s基因多樣性指數(shù)(期望雜合度)Hes=0.157，Shannon多態(tài)性信息指數(shù)Is=0.276；在居群水平上，各居群平均多態(tài)性位點百分率PPLp=38

4、.76%，有效等位基因數(shù)nep=1.185，Nei，s基因多樣性指數(shù)Hep=0.114，Shannon，s多態(tài)性信息指數(shù)Ip=0.176；居群間遺傳分化系數(shù)Gst=0.276；分子方差分析AMOVA顯示，省沽油居群間與居群內遺傳變異分別占總遺傳變異的43.07%和56.93%，表明省沽油的遺傳變異主要體現(xiàn)在居群內個體間的遺傳差異，但居群間也呈現(xiàn)了高度的遺傳分化；UPGMA聚類分析可將6個省沽油居群明顯區(qū)分開來，且表明分組情況與居群的地理