Il-17F對大鼠成骨細胞BMp-2及Noggin mRNA表達的影響.pdf

1、目的：骨細胞和免疫細胞共同起源于骨髓細胞，它們在功能上也有一定的相連，并且受一些相同細胞因子的影響。最近有研究顯示IL-17因子家族中的一個重要成員IL-17F在體內(nèi)具有促進成骨細胞的作用，但是相關(guān)研究甚少。本研究通過提取并培養(yǎng)大鼠原代成骨細胞，以不同濃度的IL-17F刺激成骨細胞，觀察IL-17F對成骨細胞的增殖能力、骨形態(tài)發(fā)生蛋白2(Bone Morphogenetic Protein2，BMP-2)及BMP-2抑制因子Noggin

2、 mRNA表達的影響。
　　方法：
　　1.大鼠原代成骨細胞的提取、培養(yǎng)及鑒定
　　新生24h內(nèi)的Wistar大鼠8只，脫頸處死后，于無菌操作下取出顱骨，完全去除骨膜、血管及結(jié)締組織，反復(fù)沖洗骨片至透亮，將骨片剪碎后，運用胰酶-膠原酶消化法及組織塊法提取原代成骨細胞。
　　將提取的原代成骨細胞加適量培養(yǎng)液于培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，并在傳代時運用差速貼壁法對成骨細胞進行純化，取純化后的第4代成骨細胞進行實驗。
　　

3、采用形態(tài)學觀察及堿性磷酸酶(ALP)染色法對成骨細胞進行鑒定。
　　2.實驗分組及IL-17F刺激
　　將純化后的第4代大鼠成骨細胞隨機分為正常對照組和實驗組。對照組使用正常培養(yǎng)液進行培養(yǎng);實驗組分別用正常培養(yǎng)液配制的含有不同濃度（1ng/ml、10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml）IL-17F的培養(yǎng)液進行培養(yǎng)，共5個實驗組，分別于干預(yù)第1、3、5天后進行指標檢測。
　　3.指標檢測

4、　　(1)采用MTT法檢測成骨細胞增殖活性。
　　(2)采用RT-PCR檢測成骨細胞BMP-2及Noggin mRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.大鼠原代成骨細胞培養(yǎng)與鑒定:
　　培養(yǎng)的原代成骨細胞貼壁生長穩(wěn)定，細胞形態(tài)和生長狀況均符合成骨細胞的特征。ALP染色結(jié)果顯示，大量陽性細胞胞核及胞質(zhì)內(nèi)可見ALP染色成的灰黑色顆粒或塊狀深染沉淀，鑒定為成骨細胞。
　　2.IL-17F對成骨細胞增殖的影響
　

5、　MTT結(jié)果顯示，與對照組相比，第1天時只有100ng/ml實驗組細胞增殖率明顯升高(P＜0.05），10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml實驗組雖然也有升高但無統(tǒng)計學意義(P＞0.05);第3天與第5天時，10ng/ml、20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml實驗組細胞增殖率均顯著升高（P＜0.05）;1ng/ml實驗組細胞增殖率在三個時間點變化均不明顯(P＞0.05)。
　　3.IL-17F對成骨細胞BMP-

6、2及Noggin mRNA表達的影響
　　RT-PCR結(jié)果顯示，與對照組相比，20ng/ml、50ng/ml、100ng/ml實驗組BMP-2 mRNA表達水平從第1天開始就明顯升高(P＜0.05)，而10ng/ml實驗組BMP-2 mRNA表達水平第3天開始才顯著升高(P＜0.05)，1ng/ml實驗組BMP-2 mRNA表達水平則在三個時間點均無明顯變化(P＞0.05)。與對照組相比，10ng/ml、20ng/ml、50ng/