硫酸二乙酯結(jié)合紫外線誘變選育赤蘚糖醇高產(chǎn)叢梗孢酵母.pdf

1、赤蘚糖醇是分子量最小，熱量值最低(≤1.66kJ/g)的糖醇，具有優(yōu)良的物理化學(xué)性質(zhì)和保健功能。赤蘚糖醇的生產(chǎn)方法有化學(xué)合成法、微生物發(fā)酵法和生物提取法等，其中發(fā)酵法是目前工業(yè)化生產(chǎn)赤蘚糖醇的唯一辦法，而如何選育高產(chǎn)的發(fā)酵菌株及確定最優(yōu)化的發(fā)酵條件是工業(yè)化生產(chǎn)的關(guān)鍵。
　　 本研究結(jié)合了微生物的化學(xué)誘變方法和物理誘變方法，分別使用化學(xué)誘變劑硫酸二乙酯(DES)和紫外線，對赤蘚糖醇產(chǎn)生菌叢梗孢酵母進(jìn)行誘變，并通過薄層層析法、分光光

2、度法和高效液相色譜法對發(fā)酵產(chǎn)物進(jìn)行定性和定量分析，篩選出赤蘚糖醇高產(chǎn)菌株并驗(yàn)證其遺傳穩(wěn)定性。通過單因素試驗(yàn)和正交試驗(yàn)方法確定高產(chǎn)誘變菌株的最適發(fā)酵條件。發(fā)酵液定性試驗(yàn)結(jié)果表明，發(fā)酵產(chǎn)物主要為赤蘚糖醇，此外還含有極少量甘油和核糖醇。通過試驗(yàn)建立了初步測定赤蘚糖醇和葡萄糖含量的分光光度法，即高碘酸氧化法和DNS法，以及精確定量的高效液相色譜法。通過DES化學(xué)誘變篩選出菌株D49，赤蘚糖醇產(chǎn)量為69.58g/L，較野生菌提高19.2％，葡萄糖

3、-赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率為28.1％。對菌株D49進(jìn)行紫外誘變，篩選得到高產(chǎn)誘變菌株D49-UV53，赤蘚糖醇產(chǎn)量為86.25g/L，較D49提高了23.87％，較野生菌提高了47.8％，葡萄糖-赤蘚糖醇轉(zhuǎn)化率達(dá)31.44％。突變菌株D49-UV53經(jīng)連續(xù)8次傳代后，測定每代的赤蘚糖醇產(chǎn)量，其偏差范圍為±2.5％，證明該菌株有很好的遺傳穩(wěn)定性。在單因素試驗(yàn)的基礎(chǔ)上設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，對高產(chǎn)誘變菌株D49-UV53進(jìn)行發(fā)酵工藝優(yōu)化。優(yōu)化后的赤蘚糖醇產(chǎn)量