超支化聚砜胺作為細(xì)胞內(nèi)輸送載體的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、超支化聚砜胺(PSA)是一種新穎的納米材料，能夠簡單一步合成并具有三維立體高度支化結(jié)構(gòu)和末端豐富的氨基功能基團(tuán)。本課題的目的是通過研究PSA生物相容性、細(xì)胞對其內(nèi)吞作用和在小鼠體內(nèi)的生物分布，以探討PSA作為載體將藥物等生物活性分子進(jìn)行體內(nèi)輸送的可行性。 采用A2+BB2單體共聚法制備PSA，通過MTT法比較不同孵育時(shí)間對多種細(xì)胞的生物相容性，并與第四代樹狀大分子聚酰胺-胺(PAMAM-G4)進(jìn)行了比較；在堿性條件下共價(jià)結(jié)合PS

2、A與異硫氰酸熒光素(FITC)，形成熒光標(biāo)記的超支化聚砜胺聚合物(PSA-FITC)。將聚合物與細(xì)胞孵育后，在不同時(shí)間點(diǎn)通過激光共聚焦熒光顯微鏡(CLSM)分別檢測在37℃和4℃孵育條件下細(xì)胞對聚合物的內(nèi)吞作用并作比較；通過流式細(xì)胞術(shù)(FACS)量化聚合物進(jìn)入細(xì)胞的效率；以細(xì)胞器特異的熒光染料處理細(xì)胞后，CLSM觀察在不同時(shí)間點(diǎn)PSA-FITC于細(xì)胞內(nèi)的分布情況；為證實(shí)CLSM所觀察到的結(jié)果，將PSA以納米金顆粒標(biāo)記后給予細(xì)胞，制作標(biāo)本

3、后于透射電鏡下觀察納米顆粒在細(xì)胞內(nèi)的分布；利用小動(dòng)物活體分子成像系統(tǒng)研究正常Balb/c祼鼠尾靜脈注射PSA-FITC后的聚合物的生物分布，并進(jìn)行量化；為進(jìn)一步研究PSA作為藥物輸送載體的可行性，將PSA共價(jià)連接化療藥物甲氨喋呤(MTX)及配體葉酸(FA)以達(dá)到靶向于腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的葉酸受體。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)，PSA于生理環(huán)境pH條件下(pH=7.4)Zeta電位為-18.5±7.6 mV，其生物相容性良好，與細(xì)胞孵育72 h后細(xì)胞

4、半抑制濃度>1mg/mL；細(xì)胞攝入PSA-FITC高效快速，且具有時(shí)間依賴性；在4℃的孵育條件下亦能進(jìn)入細(xì)胞；CLSM及TEM均觀察到于孵育3h后線粒體中有PSA-FITC的聚集，于12 h則轉(zhuǎn)而聚集至高爾基體；在正常小鼠體內(nèi)，PSA在各主要臟器或組織中無明顯特異性濃聚；1H NMR顯示PSA與MTX及FA能夠有效連接；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)證明載藥系統(tǒng)具有葉酸靶向性和藥物細(xì)胞毒性。 一般認(rèn)為，陰離子聚合物由于與細(xì)胞膜的負(fù)電荷靜電相斥而無法穿