普魯蘭類酵母G7b菌株β-甘露聚糖酶的研究.pdf

1、β-甘露聚糖酶是一類能夠水解甘露聚糖主鏈上的β-1,4-甘露糖苷鍵的半纖維素酶類。微生物來(lái)源的β-甘露聚糖酶具有活性高,成本低,提取方便的優(yōu)點(diǎn),而且具有更寬的作用pH,溫度范圍和底物專一性等顯著特點(diǎn),在食品、醫(yī)藥、飼料、造紙、印染和石油開采等領(lǐng)域中得到了廣泛的應(yīng)用。
　　 本文從實(shí)驗(yàn)室已知的17株具有β-甘露聚糖酶活力的海洋酵母菌株中,篩選出自中國(guó)南海表層海水的酵母菌G7b菌株所產(chǎn)β-甘露聚糖酶活力最高。通過(guò)傳統(tǒng)的酵母菌種鑒定及

2、分子生物學(xué)鑒定,最終鑒定該株海洋酵母菌屬于普魯蘭類酵母(Aureobasidiumpullulans)。酵母菌G7b菌株所產(chǎn)β-甘露聚糖酶粗酶液最適反應(yīng)pH為5.0,最適反應(yīng)溫度為60℃。通過(guò)對(duì)其發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化,其最適產(chǎn)酶培養(yǎng)基和條件為:角豆膠0.6％(w/v);酵母粉0.5％(w/v),(NH4)2SO40.5％(w/v),KH2PO40.2％(w/v);海水配制,培養(yǎng)基起始pH調(diào)至6.0。在28℃,180rpm震蕩培養(yǎng)48h,其培養(yǎng)

3、上清液所含β-甘露聚糖酶活力最高,達(dá)到10.5U/ml。用粗酶液水解底物,產(chǎn)物為少量甘露糖單糖和甘露低聚糖。
　　 為進(jìn)一步研究β-甘露聚糖酶,我們對(duì)酵母G7b菌株產(chǎn)的β-甘露聚糖酶進(jìn)行了純化,并對(duì)純化酶的性質(zhì)進(jìn)行了研究。通過(guò)SephradexTMG-75凝膠過(guò)濾層析和DEAESepharoseFastFlow陰離子交換層析方法對(duì)其所產(chǎn)β-甘露聚糖酶進(jìn)行純化,通過(guò)SDS-PAGE檢測(cè)其分子量大約為66kDa,獲得單一的目的條帶。

4、最終純酶與原樣品相比,純化倍數(shù)為1.86倍,回收率為17.2％。Β-甘露聚糖酶最適作用pH5.0,在pH5.0-7.0范圍內(nèi)穩(wěn)定,最適作用溫度60℃,在低于50℃酶的穩(wěn)定性較好。環(huán)境中的Mg2+和Zn2+對(duì)酶有一定激活作用,而Hg2+、Mn2+和Cu2+對(duì)酶有抑制作用,尤其是Hg2+和Mn2+對(duì)酶有強(qiáng)烈的抑制作用。所有的蛋白抑制劑對(duì)β-甘露聚糖酶都有一定的抑制作用,其中SDS的抑制作用最為明顯。Β-甘露聚糖酶對(duì)底物角豆膠的動(dòng)力學(xué)常數(shù)Km