廣州地區(qū)兒童血清EV71-IgG陽(yáng)性率與中和抗體水平的比較及急性呼吸道感染的病原學(xué)分析.pdf

1、手足口病（HFMD）是由腸道病毒引起的一種常見(jiàn)疾病，其中腸道病毒71型（EV71）和柯薩奇病毒A組16型（CoxA16）是手足口病的主要病原體。二者主要感染兒童，以5歲以下嬰幼兒為主，可引起患兒手足部、口腔黏膜、臀部皰疹。EV71病毒感染的患兒少數(shù)還可并發(fā)嚴(yán)重的神經(jīng)性癥狀，甚至更嚴(yán)重的致死性肺水腫、心肺衰竭。目前，EV71病毒被認(rèn)為是繼脊髓灰質(zhì)炎在全球范圍內(nèi)消滅后最主要的嗜神經(jīng)性病毒之一。近年來(lái)，隨著以EV71病毒為主要病原體的 HFM

2、D在亞太地區(qū)的頻繁大爆發(fā)，HFM D的發(fā)病率和死亡率有增高的趨勢(shì)，這引起民眾、學(xué)者甚至政府的高度關(guān)注，我國(guó)于2008年5月將HFMD列為丙類傳染病。
　　目前，EV71病毒感染還沒(méi)有特效藥物或療效顯著的治療方法，機(jī)體主要依靠自身免疫能力抵御病毒。病毒侵入人體之后，免疫細(xì)胞可分泌中和抗體，中和抗體與血液里的病毒顆粒結(jié)合，阻止病毒感染細(xì)胞。了解兒童 EV71-IgG水平、中和抗體陽(yáng)性率及效價(jià)能為EV71病毒感染的防治提供數(shù)據(jù)參考。中和

3、試驗(yàn)是檢測(cè)中和抗體的經(jīng)典方法，常用于診斷腸道病毒感染。目前國(guó)內(nèi)外多單一運(yùn)用中和試驗(yàn)檢測(cè)兒童EV71病毒感染率及中和抗體水平。有關(guān)病毒特異性 IgG的測(cè)定，運(yùn)用蛋白免疫印跡（Western Blot）技術(shù)檢測(cè)病毒抗體具有很高的特異性，已被應(yīng)用于人艾滋病病毒感染的確認(rèn)。本實(shí)驗(yàn)室通過(guò)Western Blot技術(shù)檢測(cè)血清中EV71病毒的三個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白 VP1、VP2、VP3的特異性 IgG，實(shí)驗(yàn)結(jié)果排除了CoxA16等腸道病毒的交叉反應(yīng)，令人滿意

4、。因此，本研究通過(guò)中和試驗(yàn)檢測(cè)兒童EV71病毒中和抗體水平以外，還結(jié)合Western Blot實(shí)驗(yàn)檢測(cè)兒童EV71-IgG水平，對(duì)不同年齡段的兒童 EV71-IgG水平與血清中和抗體水平進(jìn)行比較分析，探討血清特異性 EV71-IgG抗體與中和效應(yīng)的關(guān)系，為疫苗的研發(fā)、EV71感染的防治提供數(shù)據(jù)參考。具體報(bào)道如下：
　　本研究選取2014年8月～11月到廣州市婦女兒童醫(yī)療中心保健科常規(guī)抽血檢查、無(wú)發(fā)熱、無(wú)手足病典型癥狀的健康兒童作為

5、研究對(duì)象。在研究中，我們根據(jù)患兒年齡將受試者分為＜1y、1～2y、2～3y、3～4y、4～5y、5～14y六個(gè)年齡組，某一組的年齡下限包含在該組內(nèi)。每個(gè)年齡組隨機(jī)抽取30到60余份樣本不等，共選取252份樣本。收集、保存其血清，以本實(shí)驗(yàn)室分離培養(yǎng)的EV71病毒C4亞型毒株為抗原，通過(guò)Western Blot方法檢測(cè)血清中EV71病毒結(jié)構(gòu)蛋白的特異性IgG抗體，確定 EV71-IgG陽(yáng)性率；運(yùn)用中和試驗(yàn)檢測(cè)血清中和抗體，確定中和抗體陽(yáng)性率

6、及效價(jià)，對(duì)不同年齡組兒童的EV71病毒感染率和中和抗體水平進(jìn)行分析比較。結(jié)果顯示，EV71-IgG陽(yáng)性率為63.1％，中和抗體陽(yáng)性率為35.7%，平均抗體滴度（Geometric mean titer，GMT）為8.0；EV71-IgG陽(yáng)性血清中，中和抗體陽(yáng)性率為41.5%，且5歲以下年齡組均處于較低水平；EV71-IgG陰性血清中，中和抗體陽(yáng)性率為23.7%，其中＜1y組為37.1%，1～2y組為13.6%。此外，72.6%的健康兒童

7、血清EV71病毒中和抗體效價(jià)在1:8或以下，1:128及以上較高效價(jià)水平的血清主要集中在5～14y組；1～3y健康兒童中和抗體陽(yáng)性率為16.3%，GMT為4.3。這些數(shù)據(jù)表明：本研究運(yùn)用Western Blot方法檢測(cè)EV71-IgG陽(yáng)性率，特異性高，結(jié)果令人滿意；兒童感染 EV71病毒后，血清中產(chǎn)生的特異性IgG抗體對(duì)EV71病毒的中和效應(yīng)不一定得以維持，血清中和抗體效價(jià)降至低水平時(shí)，對(duì)機(jī)體無(wú)法起保護(hù)作用；部分1歲以內(nèi)兒童血清缺乏EV

8、71-IgG抗體，但仍可對(duì)EV71病毒產(chǎn)生中和效應(yīng)，提示EV71-IgG并非決定中和效應(yīng)的唯一因素，血清中含有IgG抗體以外的其它因素參與病毒中和作用，推測(cè)可能還有非抗體性抗體因素參與，在宿主抵御感染方面起到重要作用。
　　急性呼吸道感染（ARTIs）是全球范圍內(nèi)最常見(jiàn)的傳染性疾病之一，也是導(dǎo)致全球5歲以下兒童致病和致死的主要病因之一。ARTIs的病原譜較廣，引起 ARTIs的病原體有腺病毒（ADV）、呼吸道合胞病毒（RSV）、流

9、感病毒A型（IVA）、流感病毒B型（IVB）、副流感病毒（PIV）、冠狀病毒（hCoV）、人偏肺病毒（hMPV）、人博卡病毒（hBoV）、鼻病毒（RHV）、肺炎支原體（MP）、肺炎衣原體（CP）、軍團(tuán)菌（LP）、肺炎鏈球菌（Streptococcus pneumoniae）、流感嗜血桿菌（Haemophilus influenzae）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、Q熱立克次體（C.burnetii）等。

10、病原體種類多、對(duì)藥物敏感性不同，許多病原體感染力強(qiáng)、傳播快、潛伏期短，病人發(fā)病急、病后免疫力不能長(zhǎng)期維持，這些因素都使得ARTIs極易發(fā)生大流行。因此，了解ARTIs的病原體種類和分布對(duì)AR TI s的防治有重大意義。
　　然而國(guó)內(nèi)外尚少見(jiàn)相關(guān)病原體的大樣本流行病學(xué)數(shù)據(jù)供參考分析。本研究收集2011-2012年在廣州市婦女兒童醫(yī)療中心就診的20160例急性呼吸道感染患兒血清標(biāo)本，采用間接免疫熒光方法檢測(cè)血清MP、LP、C. bur

11、netii、CP、ADV、RSV、IVA、IVB及PIV九種病原體的IgM抗體。20160例患兒中男童13318例，女童6842例,男女比例1.9:1，檢測(cè)結(jié)果表明：僅CP及C. burnetii為男性感染高于女性，男女比例分別為（男/女）1.25、1.15?；純褐形荒挲g為3歲2個(gè)月，不同年齡組病毒構(gòu)成比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，1歲以內(nèi)兒童主要感染RS V病毒，1歲以后以感染MP為主。標(biāo)本的總檢出率為43.5%，患兒感染前三位的病原為MP（33.

12、2%）、RSV（10.3%）、ADV(6.63%)，其它病原檢出率從高到低依次為IVB（4.50%）、LP（3.84%）、IVA（2.72%）、PIV（2.68%）、CP（0.47%）、C.burnetii（0.22%）。單重感染、雙重感染、三重感染的比率分別為70.20%（6160）、25.22%（2213）及4.57%（401），僅1例為ADV、IVB、MP及RSV四重感染。病原流行呈季節(jié)性分布，不同季節(jié)病原檢出率存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，冬