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文檔簡(jiǎn)介
1、目的:建立熒光定量PCR檢測(cè)牛乳中產(chǎn)腸毒素A基因的金黃色葡萄球菌的方法。
方法:以金黃色葡萄球菌耐熱腸毒素A保守序列為目標(biāo),根據(jù)GenBank公布的金黃色葡萄球菌SEA基因序列,設(shè)計(jì)了2對(duì)引物。在對(duì)臨床分離的金黃色葡萄球菌基因組DNA測(cè)序正確后,在鑒定其特異性及靈敏度的基礎(chǔ)上建立了檢測(cè)牛乳中金黃色葡萄球菌腸毒素A基因的熒光定量PCR檢測(cè)方法。
結(jié)果:成功克隆了金黃色葡萄球菌SEA基因保守區(qū)序列。全序列由774
2、個(gè)堿基構(gòu)成,克隆序列與Genbank公布參比序列相似性達(dá)到了99%。熒光定量檢測(cè)引物的特異性良好,標(biāo)準(zhǔn)曲線符合要求,靈敏度水平也達(dá)到49.5fg。對(duì)人工污染的牛乳中含SEA的金黃色葡萄球菌的檢測(cè)結(jié)果顯示,檢出細(xì)菌檢測(cè)限為200CFU/mL。
結(jié)論:成功克隆牛源金黃色葡萄球菌SEA序列,并建立了快速撿測(cè)牛乳中含SEA的金黃色葡萄球菌的熒光定量PCR方法,為快速檢測(cè)牛原料乳中含有腸毒素A基因的金黃色葡萄球菌提供了有效的技術(shù)支撐
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