大豆皂甙的提取、分離及酶解.pdf

1、大連理工大學博士學位論文大豆皂甙的提取、分離及酶解姓名：田晶申請學位級別：博士專業(yè)：生物化工指導教師：蘇志國;金鳳燮20010101大連理工大學博士學位論文佳時間為1 2 h ，最佳p } { 值為5 。上述三種酶液均能水解皂甙變成低糖皂甙產物及甙元。s p ．4 8 S 菌所產酶液與B 組大豆皂甙反應，所得產物的分子量為6 6 8和7 8 0 ，是B 組大豆皂甙單體被水解后的低糖大豆皂甙，分子式為c ，e H ?o ·2 k

2、 l t 0和c 。H ?0 。。其中，分子量為6 6 8 的大豆皂甙是3 一氧一[ D —D 一吡喃葡萄糖醛酸基]大豆甙元B 帶兩個結晶水，是B 組大豆皂甙水解掉一個和兩個糖基的產物；分子量為7 8 0 的大豆皂甙，是3 一氧一k —L —n L L P 南鼠李糖基( 1 - - ) 2 ) B —D 一毗喃葡萄糖醛酸基] 大豆甙元B ，是B 組大豆皂甙I I 水解掉一個a —L - P [ ±喃阿拉伯糖基的產物。s p ．

3、4 8 s 和s p ．8 4 8 s 菌產酶的最佳培養(yǎng)時間為4 8 h ；s p ．3 9 s 菌產酶的最佳培養(yǎng)時間為3 6 h 。 對s p ．4 8 s 、s p ．8 4 8 s 和s p ．3 9 s 菌所產的1 3 一葡萄糖苷酶進行分離提純的研究表明，利用高效液相制備色譜可以分離提純混合酶液。其中，s p ．4 8 s 和s p ．8 4 8 S 菌所產1 3 一葡萄糖苷酶均在4 0 ％左右的鈉鹽濃度下被洗脫下來，收率分別為

4、3 ．O ％和3 ．6 ％；s p ．3 9 s 菌所產0 一葡萄糖苷酶在3 3 ％的鈉鹽濃度下被洗脫下來，收率為3 ．1 ％。對于s p ．4 8 S 和s p ．8 4 8 s 菌所產1 3 一葡萄糖苷酶，酶反應最適p H 均為5 ．0 ，最適溫度均為4 0 ℃，均在p H 3 ．O - p H 7 ．0 和3 0 ℃一6 0℃范圍內相對穩(wěn)定；s p ．3 9 s 菌所產B 一葡萄糖苷酶的最適p H 、最適溫度及p H穩(wěn)定范圍均與另

5、兩株菌相同，只是溫度穩(wěn)定范圍更寬，為2 0 ℃一6 0 ℃。對s p ．4 8 s 、s p ．8 4 8 s 和s p ．3 9 s 菌所產的酶經分離提純后的相應酶蛋白，進行S D S 一聚丙烯酰胺凝膠電泳，都得到電泳單點，其酶蛋白分子量分別為3 4 ，0 0 0 、3 1 ，0 0 0 和5 0 ，0 0 0 。首次考察了醬油發(fā)酵過程中大豆皂甙組成和含量的變化。一方面，由于醬油曲子中含有水解大豆皂甙糖基的酶，可以水解部分糖基，產生低

6、糖鏈、高活性的大豆皂甙；另一方面，大豆皂甙在醬油發(fā)酵過程中含量隨時間增加而增加，到一定時間后又下降，這一規(guī)律可以幫助人們在醬油生產過程中有效控制發(fā)酵時間，得到含有更多大豆皂甙的對人們健康有利的醬油產品。通過對醬油制曲過程中大豆皂甙的變化與大豆皂甙酶解情況的對比研究，發(fā)現大豆皂甙在制曲過程中產生的新皂甙與大豆皂甙酶解后產生的新皂甙很相似，說明大豆皂甙在制曲過程中的變化機理與酶解作用機理相同，都是在水解酶的作用下將大豆皂甙的糖基水解( 得到