酶解鹿茸血疏水性肽的分離及活性研究.pdf

1、鹿茸血是一種傳統(tǒng)名貴中藥，含有大量蛋白質(zhì)及人體必需氨基酸。研究表明，鹿茸血具有多種生物效用，其生物活性與蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)及氨基酸組成密切相關(guān)。本文以鹿茸血為原料進行酶解，研究了酶解產(chǎn)物的抗氧化活性和血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(Angiotensinconvertingenzyme，ACE)抑制活性；通過大孔吸附樹脂分級洗脫研究了酶解產(chǎn)物的疏水性與抗氧化及ACE抑制活性的關(guān)系；通過活性炭色譜法、反相高效液相及液相-質(zhì)譜聯(lián)用等方法獲得了具有較高抗氧化和AC

2、E抑制活性的組分。論文主要研究結(jié)論如下： 首先采用木瓜蛋白酶、酸性蛋白酶、中性蛋白酶和Alcalase蛋白酶分別對鹿茸血進行酶解：Alcalase蛋白酶水解3h的產(chǎn)物具有最高的ACE抑制活性，其ACE抑制率為90.63％；酸性蛋白酶水解3h的產(chǎn)物具有最高二苯代苦味肼自由基(DPPH')清除率，為23.10％；木瓜蛋白酶水解5h的產(chǎn)物羥自由基(OH')清除率最高，為96.7％。對水解產(chǎn)物的水解度、抗氧化及ACE抑制活性進行統(tǒng)計分析

3、，結(jié)果表明對于本實驗，水解產(chǎn)物抗氧化活性與水解度顯著正相關(guān)，而ACE抑制率與DPPH'清除率顯著正相關(guān)。 采用DA201-C大孔吸附樹脂對鹿茸血酶解物進行疏水性分離，采用不同濃度乙醇進行梯度洗脫。結(jié)果表明組分疏水性值隨乙醇濃度的升高而升高，75％乙醇洗脫組分具有最高的疏水性值。統(tǒng)計分析表明，對于本實驗ACE抑制率與疏水性值顯著相關(guān)；DPPH'清除率與疏水性值無顯著相關(guān)；芳香族氨基酸含量對抗氧化和ACE抑制活性有重要影響。采用截留

4、分子量為6000Da的中空纖維柱對75％乙醇洗脫組分進行超濾，未能明顯提高產(chǎn)物活性。 采用活性炭色譜法對鹿茸血水解物進行分離以獲得高疏水性值、高芳香族氨基酸含量的組分。動態(tài)吸附實驗發(fā)現(xiàn)，pH值、上樣流速和上樣濃度都會影響活性炭柱的吸附量。在pH值為4、流速為0.5BV/h、濃度為10mg/mL的條件下上樣，采用六種不同的洗脫劑進行洗脫，并對洗脫組分進行活性測定。結(jié)果顯示無水乙醇和5％乙酸的混合溶液洗脫組分具有較高的抗氧化活性和A