基于納米粒子和(或)酶信號放大的免疫傳感器用于蛋白質檢測的研究.pdf

1、超靈敏的蛋白質檢測方法的研究對疾病的診斷與治療、蛋白質組學及生命科學的基礎研究具有非常重要的意義。近年來，免疫層析試紙條和電化學免疫傳感器由于其操作簡單、便捷、不需要復雜的儀器設備、可以在線檢測等優(yōu)點，已成功應用于蛋白質檢測及疾病的早期診斷，并呈現(xiàn)出良好的實際應用前景。但相對較低的靈敏度一定程度上阻礙了這兩種檢測技術的發(fā)展。納米科技的高速發(fā)展和納米材料的廣泛應用為上述關鍵問題的解決提供了新的思路與契機。本文使用SiO2納米粒子、TiO2

2、納米粒子制備了免疫層析試紙條和電化學免疫傳感器用于蛋白質的超靈敏檢測，建立了作為模板蛋白的兔免疫球蛋白G(兔IgG)、鐵蛋白的定量檢測方法并用于實際樣品的測定。由于納米粒子和（或）酶的信號放大作用，制得的免疫傳感器靈敏度有顯著提高。
　　 本論文主要包括以下幾個方面的內容：
　　 1．基于酶-納米二氧化硅標記的試紙條免疫傳感器用于蛋白質檢測的研究用反相微乳液法制備了單分散性好的二氧化硅納米粒子（以下簡稱硅納米粒子），并在

3、該粒子表面共價鍵合堿性磷酸酯酶和抗體作為標記物，利用三明治夾心免疫反應，結合便攜式讀條機實現(xiàn)了對蛋白質的實時現(xiàn)場檢測。與酶標免疫試紙條和膠體金免疫試紙條相比，制得的生物傳感器靈敏度有了明顯提高。在最佳實驗條件下，響應信號與兔IgG的濃度對數(shù)成良好的線性關系，線性范圍從0.05ngmL-1到2.5ngmL-1和2.5ngmL-1到50ngmL-1，檢測限0.02ngmL-1(S/N=3)。檢測時間16分鐘。
　　 2．酶聯(lián)熒光試紙

4、條免疫傳感器的制備及其在蛋白質定量檢測中的應用制備了一種新型的酶聯(lián)熒光試紙條免疫傳感器。這種傳感器通過堿性磷酸酯酶催化熒光底物產(chǎn)生熒光信號來定量檢測兔IgG。研究了緩沖溶液、底物用量、酶促反應時間、酶標抗體量等因素對試紙條檢測性能的影響，優(yōu)化了實驗條件。線性范圍從lngmL-1到350ngmL-1，檢測限lngmL-1(S/N=3)。其它干擾物質的存在，如人血清白蛋白(HAS)，不會引起傳感器背景響應信號變化，說明選擇性良好。通過選用復

5、雜生物基質人體血清中兔IgG的測定，說明該傳感器可以用于實際樣品中蛋白質的定量測定。
　　 3．基于納米TiO2/殼聚糖復合膜的電化學免疫傳感器在鐵蛋白檢測中的應用采用納米TiO2/殼聚糖復合膜技術將鐵蛋白抗體固定于玻碳電極表面，研制成用于檢測鐵蛋白的非標記型免疫傳感器，用差示脈沖伏安法和交流阻抗法對電極的修飾過程進行了表征。同時，以Fe(CN)637Fe(CN)64-作為氧化還原電化學探針對鐵蛋白進行了定量檢測，隨著抗原與抗體