印楝葉及其活性物質(zhì)的殺蝗活性研究.pdf

1、印楝(Azadirachta indica A. Juss)是印度傳統(tǒng)藥用植物，具有抗寄生蟲(chóng)，抗氧化，抗癌，抗細(xì)菌，抗病毒，抗真菌，抗?jié)儯瑲⒕?，抗著床，抗糖尿病，調(diào)節(jié)免疫，殺軟體動(dòng)物和殺蟲(chóng)等生物活性。近年來(lái)關(guān)于印楝提取物殺蟲(chóng)方面的研究較多，但對(duì)中華稻蝗(Oxya chinensis)的殺蟲(chóng)活性研究較少。為開(kāi)發(fā)新型植物殺蟲(chóng)劑，本文研究了印楝葉及其活性物質(zhì)對(duì)中華稻蝗5齡幼蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性。在此基礎(chǔ)上，采取生物活性追蹤結(jié)合化學(xué)分離的方法對(duì)印楝葉

2、殺蝗活性物質(zhì)進(jìn)行了分離及成分分析，同時(shí)研究了印楝葉提取物對(duì)中華稻蝗5齡幼蟲(chóng)的主要作用方式及作用機(jī)理。主要研究結(jié)果如下：
　　 1.印楝葉不同溶劑提取物的殺蝗活性研究：采用石油醚、95％乙醇和水3種不同極性溶劑對(duì)印楝葉進(jìn)行提取，以中華稻蝗5齡幼蟲(chóng)作為試蟲(chóng)，采用浸蟲(chóng)浸葉法測(cè)定印楝葉不同溶劑提取物的殺蟲(chóng)活性。結(jié)果表明：3種不同溶劑提取物的得率分別為2.20％、25.95％和46.80％，對(duì)中華稻蝗5齡幼蟲(chóng)具有較強(qiáng)殺蟲(chóng)活性的是印楝葉石油

3、醚提取物，其次是95％乙醇提取物，水提取物未表現(xiàn)出明顯的殺蟲(chóng)活性。石油醚提取物與95％乙醇提取物在25mg/mL濃度條件下，對(duì)試蟲(chóng)的殺蟲(chóng)活性差異不大，處理72h后試蟲(chóng)的死亡率分別為33.33％和26.67％，但兩者的提取得率差異顯著，所以選擇95％乙醇提取物做進(jìn)一步研究。
　　 2.印楝葉95％乙醇提取物殺蝗活性部位的篩選：采用液-液萃取法對(duì)印楝葉95％乙醇提取物進(jìn)行初步分離，并采用浸蟲(chóng)浸葉法對(duì)各萃取物進(jìn)行殺蟲(chóng)活性測(cè)定，選擇殺蟲(chóng)

4、活性最強(qiáng)的萃取物做進(jìn)一步研究。結(jié)果表明：印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物、氯仿萃取物、乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水部分的得率分別為13.88％、7.33％、4.22％、20.80％和48.34％。濃度為25mg/mL時(shí)，在該濃度條件下的所有測(cè)試時(shí)間段里，乙酸乙酯萃取物、正丁醇萃取物和水部分均未表現(xiàn)出明顯的殺蟲(chóng)活性。石油醚萃取物和氯仿萃取物表現(xiàn)出不同程度的殺蟲(chóng)活性，處理24h后，試蟲(chóng)的死亡率均為23.33％，處理48h后，試蟲(chóng)的死

5、亡率分別為73.33％和30.00％，處理72h后，試蟲(chóng)的死亡率分別為80.00％和43.33％。由此可見(jiàn)石油醚萃取物具有最高的殺蟲(chóng)活性，因而對(duì)其進(jìn)行毒力測(cè)定，結(jié)果顯示其48h和72h的半數(shù)致死濃度(Median lethalconcentration，LC50)分別為20.0667mg/mL和14.9262mg/mL。
　　 3.印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物中殺蝗活性物質(zhì)的柱層析分離：采用硅膠柱層析(洗脫劑為正己烷：乙

6、酸乙酯：丙酮(8.5：1：0.5))對(duì)印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物進(jìn)行進(jìn)一步的分離，分3段收集，采用浸蟲(chóng)浸葉法測(cè)定柱層析各段物質(zhì)的殺蝗活性，并使用氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)(Gas chromatography-mass spectroscopy,GC-MS)對(duì)殺蝗活性最強(qiáng)的柱層析段進(jìn)行成分分析。結(jié)果表明：柱層析第1段物質(zhì)具有最強(qiáng)的殺蝗活性，第Ⅱ段和第Ⅲ段物質(zhì)的殺蝗活性較弱，且這兩段物質(zhì)的殺蝗活性差異不顯著。以上三段物質(zhì)24h的LC

7、50分別為14.3563mg/mL、24.5616mg/mL和23.7878mg/mL。GC-MS對(duì)柱層析第1段物質(zhì)成分分析的結(jié)果顯示其主要由棕櫚酸乙酯、(Z，Z，Z)-9，12，15-十八碳三烯酸乙酯、二十五烷、二十六烷、二十七烷、二十九烷、三十烷、三十一烷、角鯊烯和芥酸酰胺組成。
　　 4.印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物殺蝗作用方式及作用機(jī)理研究：通過(guò)測(cè)定印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物對(duì)中華稻蝗5齡幼蟲(chóng)的拒食、觸

8、殺、胃毒和生長(zhǎng)發(fā)育抑制活性初步研究其殺蟲(chóng)作用方式，并采用浸蟲(chóng)浸葉法處理試蟲(chóng)，于處理后24h、48h和72h取出試蟲(chóng)中腸，制作石蠟切片，在光學(xué)顯微鏡和透射電鏡下觀察試蟲(chóng)中腸的病理學(xué)變化來(lái)初步研究印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物的殺蟲(chóng)作用機(jī)理。結(jié)果表明：印楝葉95％乙醇提取物的石油醚萃取物對(duì)中華稻蝗5齡幼蟲(chóng)的主要作用方式為拒食。光鏡下，蝗蟲(chóng)中腸細(xì)胞腫脹，變性，繼而局部脫落，嚴(yán)重者中腸細(xì)胞全部脫落，消融而僅剩下環(huán)肌層；電鏡下，蝗蟲(chóng)中腸柱狀