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1、結(jié)核分枝桿菌是引起結(jié)核病的病原菌,其結(jié)構(gòu)中的脂多糖是目前應(yīng)用比較廣泛的用于生產(chǎn)診斷用抗體的有效抗原,其成分主要是脂阿拉伯甘露聚糖(LAM),而LAM來自于脂多糖LPS。因此,本課題對結(jié)核分支桿菌脂多糖的提取、分離以及純化工藝進行研究,從而獲得較佳的LAM提取純化工藝路線,并獲得高產(chǎn)率、高特異性的LAM。實驗結(jié)果如下:
1、脂多糖的提取
首先,以多糖得率為檢測指標,考察了影響細胞破碎率各因素,通過單因素試驗以及
2、正交試驗,并將研磨、超聲破碎、乙醇回流結(jié)合,確立了最優(yōu)的菌體破碎、提取方案為:破碎功率為650w,回流時間為1h,乙醇濃度為50%,破碎次數(shù)50次。提取2次。
2、脫蛋白試驗
由于蛋白殘留會影響到最終脂多糖LAM的質(zhì)量,因此需要對提取物脫蛋白,實驗中選用了熱酚水法和Sevage法脫蛋白,通過單因素、正交試驗確立了較佳的工藝,綜合考慮多糖保留率及蛋白脫除率,熱酚法脫蛋白效果更佳,并對其工藝進行優(yōu)化,優(yōu)化方案為:
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