結核桿菌抗原Ag85B誘發(fā)抗腫瘤免疫應答及其機制研究.pdf

1、目的:通過對BCG Ag85B基因克隆、真核載體構建、轉染B16細胞和其促增殖活性的研究,進一步探討Ag85B在誘發(fā)抗腫瘤免疫應答中的作用,及其用于腫瘤免疫治療的可行性研究.結論:(1)BCG和結核桿菌的Ag85B的堿基序列和氨基酸序列差別甚微,結核桿菌成功培養(yǎng)需要一個多月時間,培養(yǎng)條件和培養(yǎng)環(huán)境要求較嚴格,該研究Ag85B DNA的提取選用BCG,一方面BCG使用比較安全;另一方面BCG防疫部門有售,不需要培養(yǎng)結核分枝桿菌,節(jié)約時間.

2、(2)該研究成功地從BCG中提取DNA并進一步擴增了Ag85B基因,鑒定了其序列的正確性,并且構建了重組pcDNA<,3>-Ag85B真核載體,轉染B16細胞獲得了陽性細胞克隆,用Western blotting鑒定在陽性細胞克隆內(nèi)有Ag85B表達;此陽性細胞克隆對PPD<'+>人的PBMC具有較明顯地促增殖活性,為Ag85B誘發(fā)抗腫瘤免疫應答及其機制的研究奠定了基礎.(3)小鼠背部皮下接種B16細胞,8日后小鼠背部皮下再次分別接種相同

3、數(shù)量B16細胞(對照組)、B16(pcDNA<,3>)細胞(對照組)和B16(pcDNA<,3>-Ag85B)細胞(試驗組).結果為,13日內(nèi)對照組和試驗組小鼠血清中IFN-γ含量均有所上升,隨后對照組小鼠血清中IFN-γ含量均呈現(xiàn)下降趨勢,而試驗組小鼠血清中IFN-γ含量則呈上升趨勢;13日內(nèi)對照組和試驗組小鼠血清中IL-4含量均有輕微升高,隨后逐步下降,兩組小鼠血清中IL-4含量變化差異不明顯.試驗組小鼠血清中IFN-γ明顯增高,而

4、IL-4水平較低,顯示出Ag85B誘發(fā)荷瘤小鼠Th1型細胞免疫應答,從而較有效抑制荷瘤小鼠體內(nèi)的腫瘤生長,并且荷瘤小鼠生存時間也有較明顯的延長.(4)小鼠尾靜脈注射B16細胞,8日后再次分別注射相同數(shù)量經(jīng)照射的B16(pcDNA<,3>)細胞(對照組)和經(jīng)照射的B16(pcDNA<,3>-Ag85B)細胞(試驗組).結果為,對照組小鼠在第18日肺部開始出現(xiàn)2個腫瘤結節(jié),在第23日肺部出現(xiàn)6個直徑3mm的腫瘤結節(jié);而試驗組小鼠在第18日肺