乳酸菌表面蛋白鑒定及其細菌延伸因子EF-Tu的免疫生物學特性研究.pdf

1、乳酸菌是廣泛存在于自然環(huán)境中，種類繁多，作為益生菌廣泛應用于食品、醫(yī)藥以及畜牧業(yè)等領域。乳酸菌是近些年來，對預防和治療胃腸道疾病、調節(jié)微生物菌群在胃腸道內平衡，提高機體免疫力起到了重要作用。然而乳酸菌在發(fā)揮益生作用時，通過與宿主發(fā)生粘附而定植，從而抑制致病菌的粘附。粘附是乳酸菌發(fā)揮益生作用的第一步，而粘附的主要物質是乳酸菌的表面蛋白，本實驗主要對乳酸菌的表面蛋白進行提取與鑒定，以及延伸因子EF-Tu的免疫生物學特性進行研究。研究內容如下

2、:
　　(1)對不同菌株的乳酸菌的疏水性和自凝聚能力進行測定，戊糖片球菌F28-8的疏水性、自凝聚能力最強，植物乳桿菌HP12的疏水性、自凝聚能力最弱。同一方法提取不同疏水性的乳酸菌表面蛋白，提取表面蛋白的效率不同。結果顯示，戊糖片球菌F28-8提取其表面蛋白效率卻是最低的。相反，植物乳桿菌HP12提取其表面蛋白的效率最高。
　　(2)采用3種方法提取乳酸菌表面蛋白，用1 mg/mL溶菌酶結合1 mol/L LiCl方法提取

3、乳酸菌的表面蛋白效果最好。用1 mg/mL溶菌酶結合1 mol/L LiCl提取表面蛋白的量是另外兩種方法的3倍以上。電鏡結果顯示，戊糖片球菌H13用1 mg/mL溶菌酶結合1mol/L LiCl處理后，表面蛋白明顯溶出，表明1 mg/mL溶菌酶結合1 mol/L LiCl提取表面蛋白效率最高。
　　(3)戊糖片球菌H13表面蛋白的鑒定結果顯示，表面蛋白中大多數(shù)的蛋白為中間代謝產(chǎn)物和運輸?shù)鞍祝谕幌鄬Ψ肿淤|量條帶有多種蛋白存在。

4、但延伸因子EF-Tu所在條帶蛋白種類最少，相同位置的植物乳桿菌條帶鑒定只有延伸因子EF-Tu，且具有高度免疫原性，由此可以作為乳酸菌菌株分離的蛋白靶標。
　　(4)通過延伸因子EF-Tu抗血清檢測乳酸菌的菌體和其他的非乳酸菌的菌體和裂解物進行交叉反應，大腸桿菌、沙門氏菌以及弧菌的菌體與裂解物對延伸因子EF-Tu抗血清都不呈現(xiàn)陽性反應，而戊糖片球裂解物以及植物乳桿菌、棒狀乳桿菌、干酪乳桿菌、鼠李糖乳桿菌、發(fā)酵乳桿菌的菌體和裂解物呈現(xiàn)