EHEC O175-H7的分離、鑒定及對(duì)小鼠致病性.pdf

1、腸出血性大腸桿菌(Enterohaemorrhagic Escherichia coli，EHEC)O157∶H7是一種重要的動(dòng)物源性致病菌，易引起嬰幼兒及老人腹瀉、出血性結(jié)腸炎(HC)、血栓形成性血小板減少性紫癜(TTP)及溶血性尿毒綜合征(HUS)等嚴(yán)重并發(fā)癥，部分HUS病例可致死亡。該菌長(zhǎng)期駐留于牛、羊、豬、雞等家畜家禽的腸道中，牛是主要的貯存宿主。該菌造成幼齡動(dòng)物腹瀉，并污染畜禽產(chǎn)品及水源和農(nóng)作物等，給農(nóng)牧業(yè)帶來巨大的損失，也對(duì)

2、人們的健康構(gòu)成巨大威脅。
　　 1.大腸桿菌O157∶H7的檢測(cè)和分離
　　 從南京各個(gè)地區(qū)采集新鮮樣品420份，其中糞便樣品350份，蔬菜50份，肉類10份，牛奶10份，增菌后，免疫磁珠富集，涂布篩選性培養(yǎng)基，菌株在改良山梨醇-麥康凱培養(yǎng)基(CT-SMAC)培養(yǎng)后菌落呈圓形、表面濕潤(rùn)、半透明樣，挑取可疑菌落進(jìn)行rfbE/fliC二重PCR，同時(shí)用O157和H7診斷血清做玻片凝集試驗(yàn)進(jìn)行鑒定。結(jié)果成功分離到5株出血性大腸

3、桿菌O157∶H7。所采集樣品的腸出血性大腸桿菌O157∶H7檢出率分別為8％、2％、0％、2％、2％。革蘭氏染色為陰性桿菌，并且有1株遲緩性發(fā)酵山梨醇麥康凱培養(yǎng)基。
　　 2.大腸桿菌O157∶H7分離株的鑒定
　　 設(shè)計(jì)毒力因子stx1、stx2、eae、hlyA和tccp相應(yīng)引物，針對(duì)已分離的O157∶H7菌株進(jìn)行PCR鑒定，并進(jìn)行生化試驗(yàn)和藥敏試驗(yàn)。毒力基因檢測(cè)顯示:其中4株毒力因子表型為stx1-stx2+ea

4、e+hlyA+tccp+，另有一株表現(xiàn)型為stx1+stx2+eae+hlyA+tccp+，各菌tccp基因均為陽性，但攜帶的重復(fù)片段數(shù)量有差異。不同牛場(chǎng)的分離菌株的耐藥性差異較大，其中6#對(duì)氨芐青霉素、卡那霉素、先鋒V、鏈霉素有強(qiáng)的耐藥性。
　　 3.大腸桿菌O157∶H7分離株的小鼠致病性
　　 通過灌胃攻毒方式研究血性大腸桿菌O157∶H7對(duì)BALB/C小鼠致病性:選用八周齡小鼠，用鏈霉素處理小鼠，再分別以1×10