京尼平交聯(lián)兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料結(jié)構(gòu)完整性、免疫原性及生物力學(xué)性能的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目前，脫細(xì)胞技術(shù)廣泛應(yīng)用于器官重建基質(zhì)材料制備的研究。本文旨在通過去污劑-聯(lián)合酶法(detrgent-enzymatic method，DEM)對(duì)新西蘭兔氣管實(shí)施脫細(xì)胞處理，研究經(jīng)脫細(xì)胞處理后氣管基質(zhì)材料結(jié)構(gòu)完整性、免疫原性及生物力學(xué)性能的變化;并通過對(duì)脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料進(jìn)行京尼平交聯(lián)，研究經(jīng)交聯(lián)后氣管基質(zhì)材料生物相容性、生物力學(xué)性能及血管再生性能的變化。本研究內(nèi)容包括以下二部分:
　　第一部分 去污劑-聯(lián)合酶法行兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)

2、材料的制備及性能評(píng)價(jià)
　　目的:研究兔氣管支架最佳脫細(xì)胞周期，進(jìn)行氣管基質(zhì)材料細(xì)胞外基質(zhì)結(jié)構(gòu)及生物力學(xué)性能評(píng)價(jià)。
　　方法:選取50只健康新西蘭兔，體質(zhì)量2.5～3.0 kg，雌雄不限。隨機(jī)數(shù)字表法分為10組(n=5)，A組5只氣管作為新鮮對(duì)照組，B、C、D、E、F、G、H、I、J組對(duì)應(yīng)脫細(xì)胞1、3、5、6、7、8、9周期組、異體移植組、異體移植對(duì)照組。通過去污劑-聯(lián)合酶法(DEM)分別對(duì)氣管進(jìn)行周期脫細(xì)胞處理，通過HE染色

3、、Movat五色染色、DAPI染色顯微鏡觀察，掃描電鏡(scanning electron microscope，SEM)觀察，以及生物力學(xué)性能測(cè)定，遴選出最佳脫細(xì)胞周期。選取原生氣管基質(zhì)材料及最佳脫細(xì)胞周期氣管基質(zhì)材料，應(yīng)用免疫組織化學(xué)法檢測(cè)主要組織相容性復(fù)合體第二型(major histocompatibility complex classⅡ，MHC-Ⅱ)、堿性成纖維細(xì)胞生長因子(basic fibroblast growth f

4、actor, bFGF)的表達(dá)，番紅O染色觀察，糖胺聚糖(glycoasminoglycan，GAG)含量、細(xì)胞含量以及DNA含量檢測(cè)。
　　結(jié)果:與對(duì)照組相比，經(jīng)7個(gè)DEM循環(huán)之后組織工程基質(zhì)細(xì)胞核溶解、極少數(shù)細(xì)胞核殘留，組織結(jié)構(gòu)未見明顯破壞;組織學(xué)與分子生物學(xué)分析顯示，細(xì)胞成分及細(xì)胞核物質(zhì)近乎全部去除;SEM顯示脫細(xì)胞基質(zhì)依然保持完整的結(jié)構(gòu)體系;生物力學(xué)性能檢測(cè)顯示脫細(xì)胞并未對(duì)基質(zhì)形態(tài)學(xué)及機(jī)械性能產(chǎn)生明顯影響;免疫熒光分析顯示

5、脫細(xì)胞氣管基質(zhì)細(xì)胞核物質(zhì)顯著減少(P＜0.05); DNA量化結(jié)果顯示:脫細(xì)胞基質(zhì)中DNA含量為(42.39±6.66)ng/mg，與原生組織(586.78±53.56)ng/ml相比，減少92.78％(P＜0.01)。
　　結(jié)論:通過7個(gè)周期DEM處理，能夠有效獲取長段低免疫原性兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材料，具有與原生氣管相似的結(jié)構(gòu)特征及生物力學(xué)性能，是一種較為理想的氣管基質(zhì)支架材料。
　　第二部分 京尼平交聯(lián)對(duì)兔脫細(xì)胞氣管基質(zhì)材

6、料生物力學(xué)性能及血管生成的影響
　　目的:對(duì)經(jīng)DEM法脫細(xì)胞處理的氣管基質(zhì)材料進(jìn)行京尼平交聯(lián)，研究京尼平對(duì)脫細(xì)胞氣管基質(zhì)生物力學(xué)性能及血管生成性能的影響。
　　方法:采用去污劑-聯(lián)合酶法(DEM)對(duì)新西蘭兔氣管行脫細(xì)胞處理，用京尼平交聯(lián)，對(duì)交聯(lián)后的基質(zhì)材料行生物力學(xué)測(cè)試、雞胚絨毛尿囊膜(chicken embryo chorioallantoic membrane，CAM)血管再生實(shí)驗(yàn)及氣管基質(zhì)材料異體移植實(shí)驗(yàn)研究。