優(yōu)質(zhì)冬凌草無(wú)性株系篩選的研究.pdf

1、　　目的：利用組織培養(yǎng)技術(shù)培育出冬凌草無(wú)菌苗,以無(wú)菌苗株高、莖粗、葉片數(shù)等農(nóng)藝學(xué)性狀及冬凌草甲素含量為指標(biāo),通過(guò)系統(tǒng)有效的人工定向選擇,篩選出優(yōu)質(zhì)高產(chǎn)冬凌草無(wú)性株系,為冬凌草優(yōu)良品種的選育奠定基礎(chǔ)。
　　探討稀土元素鑭、鈰對(duì)冬凌草組織培養(yǎng)及冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸、微量元素含量的影響,改良冬凌草組織培養(yǎng)培養(yǎng)基,為進(jìn)一步提高所篩選出的優(yōu)良冬凌草的品質(zhì)奠定基礎(chǔ)。
　　方法：首先初步選出冬凌草甲素含量較高、品質(zhì)優(yōu)良的三個(gè)

2、冬凌草產(chǎn)地,以三個(gè)產(chǎn)地冬凌草種子為材料,利用組織培養(yǎng)技術(shù)培育出冬凌草無(wú)菌苗,對(duì)三個(gè)產(chǎn)地冬凌草無(wú)菌苗的性狀、產(chǎn)量、質(zhì)量進(jìn)行綜合加權(quán)評(píng)分,根據(jù)評(píng)分高低再次篩選冬凌草品質(zhì)優(yōu)良的產(chǎn)地。以冬凌草株高、莖粗、葉片數(shù)等農(nóng)藝學(xué)性狀為指標(biāo),采用系統(tǒng)選育法,逐級(jí)篩選該產(chǎn)地優(yōu)良單株,再以產(chǎn)量及甲素含量為指標(biāo),對(duì)初選的優(yōu)良單株進(jìn)行產(chǎn)量及質(zhì)量評(píng)價(jià),最終篩選出優(yōu)質(zhì)冬凌草無(wú)性株系。
　　在冬凌草組織培養(yǎng)不同時(shí)期,分別添加不同濃度的稀土元素鑭、鈰,以外觀性狀

3、、產(chǎn)量及冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸含量為指標(biāo),采用重量法測(cè)定鮮重、繪制生長(zhǎng)曲線,HPLC 法測(cè)定冬凌草甲素、乙素、迷迭香酸含量,并對(duì)其進(jìn)行綜合評(píng)價(jià)。
　　結(jié)果及結(jié)論：
　　實(shí)驗(yàn)一 優(yōu)質(zhì)冬凌草無(wú)性株系篩選的研究
　　濟(jì)源、常家?guī)X、茨廟冬凌草無(wú)菌苗的綜合評(píng)分范圍在 69.60~86.30 分,常家?guī)X總分最高為86.30分,其次濟(jì)源為75.60分,茨廟最低為69.60分。濟(jì)源冬凌草甲素含量最高為 7.50mg/g

4、,因此選出濟(jì)源、常家?guī)X產(chǎn)地的冬凌草做進(jìn)一步優(yōu)質(zhì)冬凌草無(wú)性株系的篩選。冬凌草再生植株最佳采集時(shí)間為第35天。
　　根據(jù)優(yōu)良種質(zhì)評(píng)價(jià)結(jié)果,在濟(jì)源、常家?guī)X無(wú)菌苗中篩選了植株高大、健壯、顏色濃綠等外觀性狀良好的84株冬凌草,以產(chǎn)量、冬凌草甲素含量為篩選指標(biāo),進(jìn)行優(yōu)良株系的初步篩選研究,得到 56 株優(yōu)良單株。單株產(chǎn)量均大于 0.07g,冬凌草甲素含量均大于7.50mg/g。通過(guò)分組,可得到―極高產(chǎn)高含、極高產(chǎn)中含、高產(chǎn)高含、高產(chǎn)中含、

5、中產(chǎn)高含、中產(chǎn)中含、極高含‖7個(gè)優(yōu)良株系。
　　實(shí)驗(yàn)二 稀土元素鈰對(duì)冬凌草愈傷組織生長(zhǎng)及次生代謝產(chǎn)物含量的影響
　　冬凌草愈傷組織中甲素含量為0,稀土元素鑭、鈰不具有促進(jìn)愈傷組織合成甲素的作用。鑭、鈰均能促進(jìn)冬凌草生物量積累及冬凌草乙素、迷迭香酸的合成。鈰對(duì)冬凌草愈傷組織生物量及冬凌草乙素的促進(jìn)作用優(yōu)于鑭,鑭對(duì)迷迭香酸的促進(jìn)作用優(yōu)于鈰。1.0μmol/LCeCl3·7H2O條件下愈傷生物量最高,是空白條件下的2.4倍

6、。10.0μmol/LCeCl3·7H2O條件下乙素含量最高,達(dá)5.80mg/g。5.0μmol/LLaCl3·6H2O條件下,迷迭香酸含量最高,達(dá)14.20mg/g,空白條件下的含量為6.60mg/g。
　　實(shí)驗(yàn)三 稀土元素對(duì)冬凌草不定芽的分化及再生植株的影響
　　1μmol/L~10μmol/LCeCl3·7H2O不但加快冬凌草不定芽分化速度,同時(shí)也提高了不定芽誘導(dǎo)率及分化數(shù)量。培養(yǎng)基中添加 CeCl3·7H2O

7、 的愈傷組織 13~15 天開(kāi)始發(fā)芽,比空白對(duì)照組提前5~7天,不定芽誘導(dǎo)率及分化數(shù)量明顯高于空白對(duì)照組,其中 1μmol/LCeCl3·7H2O 條件下,不定芽誘導(dǎo)率最高為 82%,總芽數(shù)最高為153個(gè)。
　　不同稀土元素條件下,不同農(nóng)藝性狀、產(chǎn)量及含量之間的差異性各不相同,冬凌草各農(nóng)藝性狀之間、地上部分各性狀與鮮重之間均呈顯著性正相關(guān)。綜合評(píng)分結(jié)果顯示,CeCl3·7H2O對(duì)冬凌草再生植株的促進(jìn)作用優(yōu)于LaCl3·6H2O

8、,空白對(duì)照組綜合評(píng)分為63.49分,1μmol/LCeCl3·7H2O條件下,評(píng)分最高為87.20分,高于空白對(duì)照組23.61分,1μmol/LCeCl3·7H2O為稀土元素最佳條件選擇。
　　稀土元素對(duì)不同微量元素影響各不相同,鑭、鈰均不同程度促進(jìn)冬凌草對(duì)鎂元素、錳元素吸收,促進(jìn)作用隨著鑭、鈰濃度的升高而增強(qiáng)；鑭、鈰均不同程度抑制鐵元素的含量,抑制作用隨著鑭、鈰濃度的升高而增強(qiáng)；鈰同時(shí)抑制冬凌草對(duì)鋅元素的吸收,鑭對(duì)冬凌草吸收