海蓬子標準組分制備及其物質(zhì)基礎(chǔ)研究.pdf

1、本文首次對北美海蓬子的標準組分進行了提取分離,建立了一套系統(tǒng)提取分離海蓬子組分的標準方法和標準組分庫;主要運用高效液相色譜技術(shù)對提取分離所得到的標準組分進行了高效液相色譜分析;對標準組分的抗凝活性、抗氧化活性進行了研究。為海蓬子的相關(guān)活性研究以及在藥物、保健品方面的研究開發(fā)提供了物質(zhì)基礎(chǔ)和技術(shù)經(jīng)驗。
　　提取部分采用速度快、提取效率高的超聲波輔助溶劑提取法。水溶性組分針對多糖進行提取,分別采用超聲輔助水提、超聲輔助堿提以及超聲輔助

2、酶提三種方法進行提取,對水提組分和酶提組分直接凍干,堿提組分醇沉干燥得到粗多糖。其他提取組分分別用95％乙醇、乙酸乙酯、氯仿和石油醚等不同極性溶劑,超聲波輔助溶劑提取,蒸干即得標準組分。水溶性組分和石油醚組分不再進行分離。乙醇提取組分采用溶劑分配法進行分離,先后用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇進行萃取,蒸干得到溶劑分配組分。乙酸乙酯提取組分和氯仿提取組分則分別用硅膠柱進行分離,得到硅膠柱分離組分。以上組分共同構(gòu)成了海蓬子標準組分庫,共得到29

3、種標準組分。
　　對組分進行化學(xué)分析以研究其物質(zhì)基礎(chǔ),本實驗主要采用高效液相色譜法(HPLC)對29種標準組分進行分析。按照文獻中已有的單糖組成分析方法,對3種粗多糖成分進行單糖組成研究,水解衍生后進行HPLC分析,用乙腈-水作為流動相進行分析,得到分離效果好的液相圖譜。其他26種組分建立統(tǒng)一的液相方法進行分析,并用紫外串聯(lián)蒸發(fā)光散射檢測器(DAD-ELSD)進行檢測,流動相為甲醇-水體系,得到分離效果好的液相圖譜。
　　對

4、提取標準組分進行部分藥理活性研究,主要包含:1、體外抗凝血活性研究,利用APTT試劑盒測定活化部分凝血活酶時間,并用肝素鈉作為陽性對照。結(jié)果發(fā)現(xiàn),北美海蓬子水溶性組分、乙醇提取組分、乙酸乙酯提取組分、氯仿提取組分和石油醚提取組分均未明顯延長凝血時間,表明其無明顯抗凝血活性。因此,本實驗不再對分離組分進一步研究。2、抗氧化藥理活性研究,分別采用·DPPH自由基清除實驗、水楊酸法羥基自由基(·OH)清除實驗以及鄰苯三酚自氧化法超氧自由基(·

5、O2-)清除實驗研究組分抗氧化活性,并用L-抗壞血酸(VC)或丁基羥基茴香醚(BHA)作為陽性對照。結(jié)果發(fā)現(xiàn),北美海蓬子各極性提取標準組分均有明顯的抗氧化活性,但清除效果均弱于陽性對照。其中,組分對·OH自由基有明顯清除活性,在8 mg/mL濃度時抑制率均低于80%;濃度為5 mg/mL的各組分對·DPPH自由基的清除率均在80%以上,其中活性最強的為95%乙醇提取組分;各提取組分未表現(xiàn)出·O2-清除活性,對鄰苯三酚自氧化具有促進作用。