碳化二亞胺交聯(lián)的脫細(xì)胞版納近交系微型豬肌腱生物學(xué)特性研究.pdf

1、目的：觀察碳化二亞胺(EDC)交聯(lián)改性的脫細(xì)胞版納近交系微型豬肌腱的組織形態(tài)變化，檢測(cè)其體外降解特性、細(xì)胞毒性、免疫原性以及生物力學(xué)性能，探討其作為肌腱移植支架材料的可行性，為異種肌腱移植的進(jìn)一步研究提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：1、將取自版納近交系微型豬的趾伸肌腱按不同處理方法分為新鮮肌腱組(FT)、深低溫凍存肌腱組(DFT)、單純脫細(xì)胞肌腱組(SDT)和EDC交聯(lián)的脫細(xì)胞肌腱組(EAT)，通過(guò)HE染色光鏡觀察、掃描電鏡觀察，比

2、較各處理組肌腱的組織結(jié)構(gòu)，觀察EDC交聯(lián)對(duì)肌腱結(jié)構(gòu)的改變；2、各組肌腱加入含Ⅰ型膠原酶(60ug/ml)的PBS降解液中，于開(kāi)始降解后第1、2、3、4、5、6、7天計(jì)算降解率，比較各組肌腱降解率；3、提取各組肌腱浸提液，以浸提液為培養(yǎng)基和人成纖維細(xì)胞共培養(yǎng)，于培養(yǎng)后第1、2、3、4、5、6、7d用MTT法檢測(cè)細(xì)胞活性，評(píng)價(jià)各組肌腱的細(xì)胞毒性；4、以各組肌腱浸提液作為抗原，淋巴細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)評(píng)價(jià)各組肌腱免疫原性；各組肌腱行大鼠皮下包埋術(shù)，分

3、別于術(shù)后第1、2、3、4周行包埋肌腱HE染色組織學(xué)觀察，比較各組炎癥反應(yīng)；5、檢測(cè)各處理組肌腱的拉伸強(qiáng)度、斷裂伸長(zhǎng)率和彈性模量，比較生物力學(xué)性能。
　　 結(jié)果：1、新鮮肌腱和深低溫凍存肌腱組織結(jié)構(gòu)相似，膠原纖維排列整齊、規(guī)則，纖維間肌腱細(xì)胞散在排列；單純脫細(xì)胞肌腱腱束粗細(xì)不一，結(jié)構(gòu)松散，束間空隙、微孔形成，大小不等，束間相連疏松，未見(jiàn)腱細(xì)胞，經(jīng)EDC交聯(lián)后腱束表面光滑，腱束間連接緊密，束間形成形態(tài)大小相似的孔隙狀結(jié)構(gòu)；2、降解后

4、第7天新鮮肌腱、深低溫凍存肌腱、單純脫細(xì)胞肌腱和EDC交聯(lián)的脫細(xì)胞肌腱降解率分別為25.560±0.948％、25.950±0.890％、72.154±0.926％和23.550±0.890％，新鮮肌腱、深低溫凍存肌腱和EDC交聯(lián)的脫細(xì)胞肌腱三組間兩兩比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，而這三組肌腱和單純脫細(xì)胞肌腱間相比差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；3、各組肌腱細(xì)胞毒性比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；4、單純脫細(xì)胞肌腱和深

5、低溫凍存肌腱相比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，經(jīng)EDC交聯(lián)后單純脫細(xì)胞肌腱免疫原性較深低溫凍存肌腱明顯降低(P<0.05)，與對(duì)照組比較無(wú)顯著性差異(P>0.05)；5、生物力學(xué)檢測(cè)結(jié)果顯示，單純脫細(xì)胞肌腱和深低溫凍存肌腱相比，拉伸強(qiáng)度、彈性模量顯著下降，而斷裂應(yīng)變顯著增加(P<0.05)，經(jīng)EDC交聯(lián)后的脫細(xì)胞肌腱和深低溫冷凍肌腱相比，上述參數(shù)無(wú)顯著性差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：1.EDC交聯(lián)改性的版納微型豬脫細(xì)胞