受精蛋與非受精蛋在孵化條件下抗菌活性的初步研究.pdf

1、孵化條件下禽蛋的抗菌問題研究較少，國內(nèi)外一般只對受精蛋在孵化過程中的理化性質(zhì)和物質(zhì)交換進(jìn)行研究。為了探明受精蛋在孵化條件下的抑菌機制，本文采用浸泡接種法對受精蛋與非受精蛋在孵化條件下抗菌性質(zhì)的變化進(jìn)行了比較分析。并且分別對分離的受精蛋與非受精蛋蛋清、蛋殼與殼膜在孵化條件下抗菌性的變化進(jìn)行了比較。另外對在孵化條件下受精蛋與非受精蛋蛋清中兩種主要的抗菌蛋白（溶菌酶、卵轉(zhuǎn)鐵蛋白）含量的變化進(jìn)行了比較研究。
　　 本研究對不同孵化階段，

2、受精蛋與非受精蛋抗腸炎沙門氏菌的能力進(jìn)行了比較研究。利用1×105 cfu/mL Salmonella Enteritidis(SE)菌懸液接種受精蛋和非受精蛋，測定在不同孵化時間蛋殼與殼膜、蛋清、蛋黃的SE的侵染比例。結(jié)果表明：孵化4d，受精蛋蛋殼與殼膜、蛋清比非受精蛋抗腸炎沙門氏菌活性強(P＜0.05)，兩種蛋的蛋黃樣本都未受到侵染；孵化8、12d，兩種蛋的三個部位樣品腸炎沙門氏菌的陽性比例沒有顯著性差異(P＞0.05)；孵化17d

3、，受精蛋蛋殼與殼膜、蛋黃抗腸炎沙門氏菌活性顯著高于非受精蛋(P＜0.05)，此時受精蛋雞胚的漂洗物腸炎沙門氏菌陽性率為13.78％，非受精蛋蛋清腸炎沙門氏菌陽性率為45.16%。通過測定孵化過程中受精蛋與非受精蛋蛋清干重以及含水量的變化，發(fā)現(xiàn)蛋清在孵化過程中被濃縮，且受精蛋蛋清的濃縮作用更大。同時測定了蛋清在孵化過程中pH的變化，發(fā)現(xiàn)受精蛋蛋清pH由孵化初期的8.94，在孵化2d時升至9.30，然后逐漸降低降至8.40，非受精蛋蛋清pH

4、逐漸變大，由孵化初期的9.22升至9.69。蛋清pH的變化限制了SE在蛋清中的生長。
　　 以孵化后的受精蛋與非受精蛋蛋清為介質(zhì)，對其抗菌活性進(jìn)行了比較。發(fā)現(xiàn)蛋清對本實驗所用菌株(腸炎沙門氏菌CMCC(B)50041、金黃色葡萄球菌ATCC6538、CP5型金黃色葡萄球菌、大腸桿菌8099、豬霍亂沙門氏菌C78-1）皆具有抑制作用，且不同孵化天數(shù)的受精蛋和非受精蛋蛋清的抑菌活性有差異，同一孵化天數(shù)的受精蛋與非受精蛋蛋清的抑菌活性

5、也具有一定的差異。無論是革蘭氏陽性菌還是革蘭氏陰性菌，受精蛋與非受精蛋蛋清的抑菌性在孵化的第2d最強，之后兩者的抗菌性均逐漸減弱，蛋清對革蘭氏陽性菌具有更好的殺滅作用。對于革蘭氏陰性菌來說，受精蛋與非受精蛋蛋清經(jīng)過孵化0、1、2d，受精蛋蛋清與非受精蛋蛋清的抑菌活性基本等同。孵化3、4d時，受精蛋蛋清的抑菌活性比非受精蛋蛋清弱。對于革蘭氏陽性菌來說，受精蛋與非受精蛋蛋清經(jīng)過孵化0、1、2、3d，受精蛋蛋清與非受精蛋蛋清的抑菌活性基本等同

6、。孵化4d時，受精蛋蛋清的抑菌活性比非受精蛋蛋清的強。
　　 孵化4d時，受精蛋的抗腸炎沙門氏菌的活性高于非受精蛋，而此時受精蛋蛋清的抗腸炎沙門氏菌的活性弱于非受精蛋蛋清。這說明：孵化前期蛋清并不是主要的抵抗SE侵入的屏障。因此，通過建立蛋殼穿透模型比較孵化前期SE穿透受精蛋與非受精蛋蛋殼與殼膜的能力。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：受精蛋孵化0d與孵化1-4d的蛋殼與殼膜在抵抗SE穿透能力上具有顯著性差異(P＜0.05)，SE穿透時間從第0d的81

7、.6h下降到第4d的60.0h。非受精蛋孵化0-4d的蛋殼與殼膜在抵抗SE穿透上不具有顯著性差異(P＞0.05)，蛋殼的平均抑菌時間變化不大，一直維持在58-63h之間。0-4d，受精蛋蛋殼比非受精蛋蛋殼的抑菌時間長19.2、5.4、5.4、6.5、1.2h。
　　 為了進(jìn)一步揭示受精蛋與非受精蛋蛋清抗菌性差異的原因，本研究還采用分光光度法對蛋清中兩種主要抗菌蛋白在孵化條件下含量的變化進(jìn)行了測定和比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)：孵化過程中，受精

8、蛋與非受精蛋蛋清中溶菌酶的含量先增大后減少，受精蛋蛋清中溶菌酶含量由孵化0d的3.78mg/mL升至最大值5.23mg/mL（孵化2d）。非受精蛋蛋清中溶菌酶的含量由孵化0d時的3.86mg/mL升至最大值4.71mg/mL(孵化3d)。孵化3、4d時的受精蛋蛋清中溶菌酶的含量高于非受精蛋蛋清，由于溶菌酶主要作用于革蘭氏陽性菌，說明3-4d時，受精蛋蛋清的抗革蘭氏陽性菌的能力高于非受精蛋，這與第三章的結(jié)果相吻合。孵化過程中，受精蛋與非受