ATRQβ-001疫苗對動脈粥樣硬化的保護作用及其機制研究.pdf

1、研究目的及背景：在前期研究中，我們已經(jīng)成功制備了針對血管緊張素 II受體1型（AT1R）胞外段第二環(huán)的短肽疫苗 ATRQβ-001，該疫苗能夠顯著降低模式動物的血壓，具有良好的靶器官保護作用。大量有關腎素-血管緊張素系統(tǒng)（RAS）的研究表明，不僅僅在血壓的調(diào)控方面，在動脈粥樣硬化的病理進展過程中，RAS也同樣起著十分重要的作用。其中大部分生物效應是由血管緊張素II受體1型（AT1R）的激活所介導的。本研究主要評價疫苗干預后的ApoE-/

2、-小鼠動脈粥樣斑塊的病變程度，并與傳統(tǒng)血管緊張素受體阻斷劑（ARB）對比,深入探究該疫苗對動脈粥樣硬化保護作用的機制以及與傳統(tǒng)化藥的不同作用特性，為動脈粥樣硬化的防治提供一種新的手段。
　　研究方法：以5周齡雄性ApoE-/-小鼠作為模式動物，給予西方飲食，對比不同干預方式的作用下（A：ATRQβ-001疫苗免疫組； B：纈沙坦灌胃組； C：Qβ載體免疫組；D：空白對照組），動脈硬化的病變情況。主要包含以下幾個方面：1.檢測疫苗免

3、疫后Anti-ATR抗體滴度及維持情況；2.在體水平評估各干預組動脈粥樣斑塊的病變程度及病理特點，包括油紅染色評價斑塊大小，組化及HE染色評估斑塊穩(wěn)定程度，斑塊區(qū)域炎癥反應程度，炎癥因子水平。TUNEL凋亡染色及免疫熒光評價凋亡程度，局部區(qū)域巨噬細胞的極化。放射免疫法測定RAS激活水平等；3.離體水平評價Anti-ATR抗體對血管緊張素II（AngII）誘導的炎癥反應、細胞凋亡的抑制作用；4.離體環(huán)境下研究Anti-ATR抗體對巨噬細胞

4、脂質(zhì)代謝的干預作用。
　　結果：1. ATRQβ-001疫苗可以刺激模式動物產(chǎn)生高滴度的Anti-ATR抗體，抗體滴度經(jīng)過3次加強免疫后維持在較高水平，直到實驗研究結束；2. ATRQβ-001疫苗能有效阻斷 AT1R的激活，減少高脂喂養(yǎng)下 ApoE-/-小鼠的動脈粥樣斑塊的形成，穩(wěn)定粥樣斑塊，降低斑塊區(qū)域炎癥水平（VCAM-1，MCP-1，IL-1β等）及血管凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體（LOX-1）表達量，減少細胞凋亡發(fā)生，同

5、時，可以促進斑塊區(qū)域內(nèi)巨噬細胞向M2型方向分化；3.在離體環(huán)境下，Anti-ATR抗體可以減少由AngII誘導的內(nèi)皮細胞的凋亡，抑制巨噬細胞對氧化性低密度脂蛋白的內(nèi)吞酯化，促進攝取脂質(zhì)的水解排出；4.與化藥組相比，ATRQβ-001疫苗組在有效阻斷AT1R的同時，沒有反饋激活循環(huán)中的RAS。在實驗結束后，疫苗組動物未見明顯免疫性損傷表現(xiàn)（心、腎病理切片），疫苗的安全性得到初步驗證。
　　總結：ATRQβ-001疫苗可以有效減少高脂