布拉氏酵母菌對(duì)NAFLD大鼠腸黏膜屏障保護(hù)作用的研究.pdf

1、目前，非酒精性脂肪性肝病(Non-alcoholic fatty liver disease，NAFLD)是全球重要的健康問(wèn)題之一，也是我國(guó)越來(lái)越受重視的慢性肝病問(wèn)題。它是一組由單純肝臟脂肪變性，發(fā)展到脂肪性肝炎(Non-alcoholicsteatohepatitis，NASH)、肝硬化、肝癌的臨床癥候群。近年來(lái)隨著腸道微生態(tài)與NAFLD發(fā)病關(guān)系研究的深入，腸道菌群過(guò)度生長(zhǎng)、腸黏膜通透性增加所致的內(nèi)毒素血癥刺激機(jī)體炎癥反應(yīng)在NAFLD

2、的發(fā)生發(fā)展中的作用得到越來(lái)越多的認(rèn)可。
　　布拉氏酵母菌是目前唯一上市的真菌微生態(tài)制劑，它為腸道過(guò)路菌，在停藥一周后糞便中就不可檢測(cè)到該菌，不會(huì)影響腸道內(nèi)菌量。口服后不受膽汁、胃酸等破壞。它可與致病菌在腸上皮的黏附形成競(jìng)爭(zhēng)，可以抑制炎癥信號(hào)的傳遞表達(dá)。我們通過(guò)飼以高脂飲食成功造模，研究布拉氏酵母菌對(duì)NAFLD大鼠腸黏膜屏障的保護(hù)作用，將有助于為NAFLD的治療及預(yù)防提供理論基礎(chǔ)。
　　目的:觀察布拉氏酵母菌對(duì)NAFLD大鼠腸

3、黏膜屏障的保護(hù)作用，并對(duì)其可能機(jī)制進(jìn)行探討。
　　方法:實(shí)驗(yàn)用雄性健康Sprague-Dawley大鼠36只，體重為180±20g，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后隨機(jī)分為三組，即正常對(duì)照組(Control組，C組)、高脂模型組(Model組，M組)、高脂治療組(Treatment組，T組)，每組12只;C組飼以基礎(chǔ)飼料（其熱量為碳水化合物65.5％，蛋白質(zhì)24.2％，脂肪10.3％）喂養(yǎng)12周;M組和T組飼以高脂飼料（碳水化合物和蛋白質(zhì)各20.

4、1％，脂肪59.8％）喂養(yǎng)12周;每組各隨機(jī)處死2只，蘇丹黑染色觀察肝臟脂質(zhì)沉積程度確定造模成功。隨后T組開(kāi)始給予布拉氏酵母菌灌胃(75*108 CFU/kg· d-1)，C、M組給予等容量的生理鹽水灌胃;治療過(guò)程中每周隨體重變化調(diào)整灌胃量。20周時(shí)在麻醉狀態(tài)下腹主動(dòng)脈取血處死大鼠，收集血液測(cè)定丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(ALT)、天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、甘油三酯(TG)、腸型脂肪酸結(jié)合蛋白(IFABP)、腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、內(nèi)

5、毒素水平;觀察肝臟的大體情況，稱(chēng)肝臟濕重，采用蘇丹黑染色觀察肝臟病理變化;腸組織行HE染色觀察腸絨毛完整程度，免疫組化染色檢測(cè)腸黏膜occludin蛋白的表達(dá)情況。留取大鼠盲腸內(nèi)糞便，用于糞便大腸桿菌、擬桿菌定量檢測(cè)。
　　結(jié)果:
　　1、大鼠體重(g)、肝重(g)和肝指數(shù)(肝重/體重×100％):M組大鼠的體重(548.7±16.1)、肝重(17.516±1.112)、肝指數(shù)(3.191±0.170)均明顯高于C組的體重(

6、423.2±19.2)、肝重(9.493±0.739)及肝指數(shù)(2.241±0.112)，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。T組體重(499.1±18.1)、肝重(13.062±1.307)和肝指數(shù)(2.616±0.230)與M組相比均明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　2、血清TG(mmol/l)、ALT(u/l)、AST(u/l)水平:M組TG（0.585±0.057）、ALT(78.75±10.92)、 AST

7、(205.74±10.05)較C組TG(0.373±0.081)、ALT(30.99±8.59)、AST(108.04±11.60)顯著增高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);T組的AST(194.42±13.74)與M組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);T組TG(0.541±0.072)、ALT(72.36±9.87)與M組相比稍有下降，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　3、血清內(nèi)毒素(EU/ml)及TNF-α(

8、ng/ml)水平:M組內(nèi)毒素（0.306±0.054）、TNF-α(1.160±0.129)較C組內(nèi)毒素(0.201±0.047)、TNF-α（0.917±0.115）顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;T組內(nèi)毒素（0.249±0.026）、TNF-α(1.042±0.078)與M組相比均明顯降低，有顯著性差異（P＜0.05）。
　　4、血清IFABP(pg/ml)水平:M組IFABP(288.76±59.17)較C組IF

9、ABP(137.19±39.12)明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;T組IFABP(193.02±27.13)與M組相比明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。
　　5、組織病理結(jié)果:(1)在12周時(shí)蘇丹黑染色顯示M、T組肝細(xì)胞脂肪變明顯增加，證實(shí)造模成功。20周時(shí)肝組織蘇丹黑染色提示M組肝細(xì)胞脂肪變(2.90±0.32)較C組(0.00±0.00)明顯增加(P＜0.05);治療后，T組肝細(xì)胞脂肪變(1.80±0.7

10、9)較M組明顯減少(P＜0.05）。(2)腸黏膜組織HE染色結(jié)果:光鏡下，C組腸絨毛排列整齊，結(jié)構(gòu)完整;M組腸絨毛變短、局部有絨毛脫落，排列欠整齊，可見(jiàn)炎性細(xì)胞浸潤(rùn);與M組相比，T組腸絨毛輕度水腫，排列較整齊，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)較少。
　　6、免疫組織化學(xué)結(jié)果:M組的腸黏膜occludin蛋白(0.042±0.006)較C組(0.177±0.007)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05）;T組(0.049±0.010)較M組表達(dá)稍有

11、增加，但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。
　　7、糞便PCR結(jié)果(log10(CFU/g)):(1)M組的大腸桿菌(E.Coli)數(shù)量(5.98±0.08)較C組(4.00±0.09)明顯增加，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05），與M組相比，T組大腸桿菌數(shù)量(4.92±0.09)明顯下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。(2)M組的擬桿菌數(shù)量(8.04±0.17)較C組(9.47±0.09)明顯減少，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）