JNK-FoxO1-puma信號(hào)通路調(diào)控氧化應(yīng)激引起的卵巢顆粒細(xì)胞凋亡.pdf

1、大量實(shí)驗(yàn)表明，氧化應(yīng)激引起的卵巢顆粒細(xì)胞凋亡是雌性動(dòng)物體內(nèi)卵泡閉鎖的主要原因。研究氧化應(yīng)激條件下卵巢顆粒細(xì)胞凋亡的調(diào)控機(jī)制，可以為治療動(dòng)物卵泡異常閉鎖及不孕提供完整的理論依據(jù)和藥物靶點(diǎn)。Forkhead box protein O轉(zhuǎn)錄因子(FoxO)是Fox家族中研究最深入的O亞家族成員，它參與了細(xì)胞的增殖、DNA損傷修復(fù)、凋亡、分化、代謝等過(guò)程。
　　本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明氧化應(yīng)激下FoxO1在顆粒細(xì)胞凋亡中表達(dá)量顯著上升，然而F

2、oxO1如何發(fā)揮調(diào)控機(jī)制尚不清楚。本文旨在探討氧化應(yīng)激條件下，F(xiàn)oxO1表達(dá)與核定位特點(diǎn)以及對(duì)下游基因調(diào)控作用。通過(guò)對(duì)雙氧水處理的氧化應(yīng)激引起體外培養(yǎng)小鼠卵巢顆粒細(xì)胞模型研究，我們發(fā)現(xiàn)C-Jun氨基末端激酶（C-Jun NH2-Terminal Kinase，JNK）活性隨著雙氧水濃度的變化而顯著升高。而本實(shí)驗(yàn)室前期研究表明FoxO1參與了卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡。由此我們推測(cè)JNK參與了FoxO1介導(dǎo)氧化應(yīng)激引起的顆粒細(xì)胞凋亡。當(dāng)通過(guò)向細(xì)胞

3、培養(yǎng)液中添加JNK的抑制劑抑制JNK活性時(shí)，TUNEL熒光染色結(jié)果表明卵巢顆粒細(xì)胞的凋亡率顯著下降。利用免疫熒光技術(shù)，我們發(fā)現(xiàn)JNK作為一種應(yīng)激活化蛋白激酶可調(diào)控FoxO1轉(zhuǎn)錄因子的核定位。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，氧化應(yīng)激處理顆粒細(xì)胞，可導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)FoxO1進(jìn)入細(xì)胞核后mRNA水平和蛋白水平顯著升高。通過(guò)熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)質(zhì)粒的構(gòu)建，我們發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)oxO1具有啟動(dòng)自身轉(zhuǎn)錄的功能，它可以結(jié)合到自身基因的啟動(dòng)子上啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄，從而放大自身調(diào)節(jié)作用。本研究還