飼料和豬尿液中非目標物篩查技術及應用研究.pdf

1、三聚氰胺、瘦肉精等安全事件的發(fā)生，對我國奶、肉產(chǎn)業(yè)產(chǎn)生了重大的危害，而且影響至今，其原因主要是，原有的針對幾種特定目標化合物的檢測，無法實現(xiàn)對非目標風險化合物的快速篩查，難以實現(xiàn)有效的監(jiān)測和預警。同時，由于獸藥具有藥物種類繁多、更新速度快、添加手段隱蔽等特點，致使養(yǎng)殖業(yè)中存在的潛在安全隱患巨大。因此盡早發(fā)現(xiàn)養(yǎng)殖業(yè)中新型未知添加物的相關研究，建立針對非目標風險污染物的檢測方法，變事后應對為主動監(jiān)管，早發(fā)現(xiàn)早治理，避免對產(chǎn)業(yè)產(chǎn)生重大影響，對

2、保證飼料和畜產(chǎn)品質(zhì)量安全至關重要。
　　本論文重點圍繞飼料和豬尿液中非目標物的篩查技術展開研究，主要內(nèi)容及結果為:
　　(1)在優(yōu)化樣品前處理方法和液相色譜、質(zhì)譜參數(shù)的基礎上，建立了飼料和豬尿液中獸藥的液相色譜-四級桿飛行時間質(zhì)譜檢測方法，以0.1％EDTA-乙腈-甲醇（1∶1∶1，含0.1％甲酸）混合溶液、甲醇/乙腈(1∶1)混合溶液作為提取劑，0.1％甲酸水、甲醇溶液作為流動相梯度洗脫。質(zhì)譜條件為TOF Scan全掃描模

3、式（飼料樣品）、MS模式（豬尿液樣品）進行一級數(shù)據(jù)采集。飼料樣品為IDA模式:自動調(diào)節(jié)CE值、響應大于100 cps的離子進行二級信息采集;豬尿液樣品為Targeted MS/MS模式:Fragmentor碎裂電壓125V、CE值15-50 V范圍線性優(yōu)化進行二級信息采集。采用的相對簡單的前處理條件對飼料樣品進行處理，保證樣品中盡可能多的化合物信息被保留。
　　(2)通過統(tǒng)計學分析方法中噪音過濾、峰對齊、峰排除等參數(shù)的優(yōu)化，建立了

4、飼料和豬尿液異常樣品辨析的主成分分析(PCA)模型和正交偏最小二乘判別分析(OPLS-DA)模型。研究發(fā)現(xiàn)，兩種統(tǒng)計學模型能夠根據(jù)所提取出的樣品中所有離子的一級信息，正確的辨析與空白樣品有差異的異常樣品。通過研究不同藥物添加數(shù)量、不同飼料基質(zhì)種類（濃縮料、配合料、預混料、豬尿液）、不同藥物添加濃度下兩種模型的辨析能力，得到PCA模型、OPLS-DA模型對不同樣品中的未知離子的辨析能力不受藥物數(shù)量、基質(zhì)種類、藥物濃度的影響。
　　(

5、3)通過對PCA和OPLS-DA結果中離子信息的歸納、權重比較等的研究，建立了飼料和豬尿液中未知離子的判別方法。研究表明:在飼料樣品的PCA模型中，當載荷圖中PC1權重大于0.18、概要圖中異常組的離子權重含量（30以上）是空白組的4倍以上，可以判定為導致差異的未知離子;在豬尿液樣品的PCA模型中，處在S-Plot圖中P-Cov值大于150的范圍、Box-whiskerPlot圖中兩組樣品之間的含量相差在10以上的離子，判定為未知離子。

6、在OPLS-DA模型中，S-Plot圖中P-值大于0.1、VIP圖中VIP值大于1的離子為未知離子。所建立的未知離子判定指標不受樣品基質(zhì)種類、藥物濃度的影響。
　　(4)通過選擇出的未知離子精確質(zhì)量數(shù)、同位素豐度、二級斷裂等信息，建立了飼料和豬尿液中未知離子結構式確證方法。通過精確質(zhì)量數(shù)信息和同位素豐度信息進行分子式生成，結合匹配分數(shù)大于85的分子式與自建譜庫進行比對，確認未知離子的結構式信息;結合分子式信息和二級質(zhì)譜信息及匹配分