紅霉素分子印跡聚合物制備及免疫檢測應用研究.pdf

1、本文采用本體聚合法制備紅霉素分子印跡聚合物，并應用所制備的紅霉素分子印跡聚合物作為人工抗體替代紅霉素的生物抗體，建立了一種紅霉素分子印跡化學發(fā)光免疫檢測方法，結果如下：
　　1.紅霉素分子印跡聚合物合成
　　以紅霉素為模板分子，甲基丙烯酸為功能單體，乙二醇二甲基丙烯酸酯為交聯(lián)劑，乙腈為溶劑，偶氮二異丁腈為引發(fā)劑，恒溫熱聚合制備紅霉素分子印跡聚合物。
　　2.紅霉素分子印跡聚合物制備條件的優(yōu)化
　　(1)模板分子、

2、功能單體、交聯(lián)劑的用量：當模板分子、功能單體、交聯(lián)劑摩爾比為1:4:20時，紅霉素分子印跡聚合物吸附性能最佳。
　　(2)聚合溶劑的選擇(乙醇，醇，乙腈)：當溶劑為乙腈時,紅霉素分子印跡聚合物吸附性能最佳。
　　(3)引發(fā)劑用量的選擇（0.01g、0.05g、0.1g、0.2g、0.3g）：當引發(fā)劑用量為0.1g時，吸光度值最小，模板分子與功能單體聚合效果最佳。
　　(4)聚合溫度的選擇（30℃、40℃、50℃、60℃

3、70℃）：當在60℃恒溫水浴的環(huán)境下來進行聚合反應，吸光度值最小，聚合效果最好。
　　(5)聚合反應時間的選擇：當聚合反應時間為24h時，聚合反應最充分，合成的紅霉素分子印跡聚合物吸附效果最好。
　　(6)聚合物洗脫：配制不同比例的甲醇乙酸混合溶液分別于索式提取器和振蕩器中，對紅霉素分子印跡聚合物進行洗脫處理，當甲醇與乙酸的體積比為1:1時，在振蕩器中洗脫，其洗脫時間最短為24h。
　　3.紅霉素分子印跡聚合物性能

4、r>　　(1)紅霉素分子印跡聚合物吸附性能研究，當紅霉素溶液濃度為170?g/mL時，紅霉素分子印跡聚合物的吸附量最大，為130.8?g/mg，遠遠高于非印跡的最大吸附量34.6?g/mg，接近其吸附量的4倍，說明實驗制備出來的紅霉素分子印跡聚合物對紅霉素表現出優(yōu)越的吸附性能。
　　(2)紅霉素分子印跡聚合物吸附動力學
　　由于吸附動力學曲線不隨底物起始濃度的改變而改變，并且在紅霉素濃度為140?g/mL時有急劇升高的趨勢，

5、隨著吸附時間的增加，MIP的空穴捕獲越來越多的紅霉素分子，吸附量迅速增大，4h時基本達到吸附平衡，吸附效果不再受時間的影響。
　　(3)紅霉素分子印跡聚合物特異性研究:
　　紅霉素分子印跡聚合物對濃度為140?g/mL的紅霉素、羅紅霉素、氯霉素溶液吸附4h時，紅霉素印跡聚合物對紅霉素、羅紅霉素、和氯霉素的吸附量分別為90.4?g/mg、30.2?g/mg、18.6?g/mg，因此實驗制備出的分子印跡聚合物對模板分子的吸附量遠

6、遠大于對其結構類似物氯霉素和羅紅霉素的吸附量，說明MIP對紅霉素具有特異性吸附能力。
　?。?）紅霉素分子印跡聚合物熱穩(wěn)定性:
　　隨著溫度的升高紅霉素分子印跡聚合物的吸附性能隨之下降，但整體來看下降的比較平緩，經溫度100℃處理完后，聚合物的吸附量達到了108.4?g/mg，仍是最高吸附量的83％，所以說明實驗制備的紅霉分子印跡聚合物受溫度的影響極小。
　　（5）紅霉素分子印跡聚合物耐酸堿腐蝕性
　　紅霉素分子

7、印跡聚合物經過酸堿溶液浸泡后其形態(tài)基本保持不變，并且能達到最大吸附量的92.9%-96.8%,并且在弱酸和弱堿浸泡下的吸附量要稍高于強酸和強堿浸泡下的吸附量，說明實驗制備的MIP受化學性質的影響極小。
　　（6）紅霉素分子印跡聚合物重復性
　　紅霉素分子印跡聚合物每次的吸附量都會比前一次有所下降，對同一印跡聚合物進行了五次吸附解吸的實驗，第五次吸附量為112.3?g/mg，是第一次吸附量的87.46％。由此可見，實驗制備的分

8、子印跡聚合物重復性使用良好。
　　4．建立一種應用所制備的紅霉素分子印跡聚合物代替生物抗體測定紅霉素的直接競爭酶聯(lián)免法，并與化學發(fā)光免疫檢測法聯(lián)用來檢測水產品中紅霉素的殘留量。以紅霉素濃度為橫坐標，發(fā)光值為從坐標，建立了紅霉素藥殘化學發(fā)光免疫檢測的標準曲線，線性方程為：y=-3154.5x+27563，相關系數為0.988.最低檢出限為0.87?g/L，線性范圍0.9?g/L-8.1?g/L，其加標回收率在87.7%-92.9%之

9、間，批內變異系數小于8.5%,而批間變異系數則小于13.2%。
　　5．應用所建立的紅霉素分子印跡化學發(fā)光免疫法與紅霉素Elisa分析法進行紅霉素檢測結果的比較，結果顯示，當測量海參均質樣品中紅霉素添加量為1?g/kg時，紅霉素Elisa分析法的檢測結果為0.926±0.02?g/kg，紅霉素分子印跡化學發(fā)光免疫法的檢測結果為0?g/kg，當測量海參均質樣品中紅霉素添加量為3?g/kg時，紅霉素Elisa分析法的檢測結果為2.78