自交聯(lián)和細胞內(nèi)解交聯(lián)的聚合物囊泡抗腫瘤納米藥物.pdf

1、小分子抗癌藥物用于腫瘤治療因存在諸多問題而影響其治療效果，如毒副作用大、循環(huán)時間短、生物利用率低等。應用納米藥物載體如聚合物膠束、聚合物囊泡、納米凝膠和脂質(zhì)體等可有效地解決這些問題。但是，納米藥物載體的應用和發(fā)展還存在著兩個亟需解決的矛盾，即提高體內(nèi)循環(huán)穩(wěn)定性和增強靶細胞內(nèi)藥物釋放的矛盾，以及表面聚乙二醇（PEG）化以延長其循環(huán)時間和增加靶細胞內(nèi)吞量的矛盾。為了解決這些問題，本論文設(shè)計了兩種腫瘤靶向多肽修飾的、還原敏感的自交聯(lián)和細胞內(nèi)解

2、交聯(lián)的生物可降解聚合物囊泡（SCID-Ps）用于提高其循環(huán)穩(wěn)定性，延長循環(huán)時間，促進其在腫瘤細胞的靶向富集和內(nèi)吞，及加快抗癌藥物在靶細胞內(nèi)的釋放，從而增加囊泡藥物對腫瘤的治療效果。
　　論文第二章設(shè)計合成了基于新型功能性碳酸酯單體的雙親性二嵌段聚合物聚乙二醇-b-聚（三亞甲基碳酸酯-co-1，2-二硫戊環(huán)三亞甲基碳酸酯）（PEG-P(TMC-DTC)）和可靶向α5β1整合蛋白的PHSCNK（PK6）多肽修飾的聚合物PK6-PEG-

3、P(TMC-DTC)，二者在水中可自組裝、通過 pH梯度法高效裝載親水小分子抗癌藥物鹽酸多柔比星（ DOX·HCl），并自交聯(lián)形成腫瘤靶向、還原敏感可逆交聯(lián)的聚合物囊泡（DOX-xPK6/SCID-Ps），靶分子的密度x可通過改變二者的比例來調(diào)節(jié)。該囊泡粒徑小、分布窄、生理條件下穩(wěn)定性高，能在細胞內(nèi)還原環(huán)境下由于疏水部分雙硫交聯(lián)的快速斷裂而導致囊泡解交聯(lián)快速藥物釋放。細胞毒性實驗表明， DOX-PK6/SCID-Ps對α5β1受體高表達

4、的人乳腺癌細胞 MDA-MB-231和高轉(zhuǎn)移性小鼠黑色素瘤細胞B16F10均具有較好的靶向性，其中含60％ PK6的聚合物囊泡DOX-60PK6/SCID-Ps具有最佳的靶向效果，殺死細胞的能力最強，半致死濃度（IC50）最低。激光共聚焦顯微鏡和流式細胞儀檢測結(jié)果也驗證了DOX-60PK6/SCID-Ps通過受體介導的內(nèi)吞作用進入癌細胞，并快速釋放藥物至細胞核，誘導細胞凋亡。血液循環(huán)實驗表明，DOX-60PK6/SCID-Ps在體內(nèi)循環(huán)

5、中穩(wěn)定，半衰期4.13小時，遠長于自由藥的循環(huán)時間0.2小時。最大耐受劑量（MTD）測試結(jié)果表明該囊泡可以顯著提高DOX的耐受劑量，DOX-60PK6/SCID-Ps的MTD超過100 mg/kg，而臨床應用的脂質(zhì)體阿霉素里葆多?（DOX-LPs）的MTD則低于20 mg/kg。荷B16F10瘤的小鼠體內(nèi)研究表明， DOX-60PK6/SCID-Ps可以提升DOX在腫瘤部位的富集，6小時達到DOX-LPs的4倍。體內(nèi)抗腫瘤實驗表明，DO

6、X-60PK6/SCID-Ps在劑量為20、40 mg/kg多次給藥以及100 mg/kg單次給藥時，均可顯著抑制B16F10腫瘤的生長，并無顯著毒性，延長了小鼠的存活期；而DOX-LPs雖腫瘤抑制效果強但毒副作用顯著，小鼠存活期短。因此該還原敏感可逆交聯(lián)的靶向聚合物囊泡為惡性腫瘤的治療提供了一個新的平臺。
　　基于這樣一個平臺技術(shù)，論文第三章設(shè)計制備了表面修飾靶向多肽cNGQGEc（cNGQ）的囊泡納米藥物cNGQ/SCID-P

7、s，用于整合蛋白α3β1過表達的非小細胞肺癌A549細胞的聯(lián)合靶向治療。該囊泡具有與第二章所述囊泡類似的穩(wěn)定性、靶向內(nèi)吞及細胞內(nèi)藥物快速釋放的特性。利用pH梯度法和疏水相互作用，可分別在囊泡親水內(nèi)腔和疏水膜內(nèi)同時裝載親水藥物鹽酸表柔比星（EPI·HCl）和疏水藥物多西他賽（DTX）得到 ED-cNGQ/SCID-Ps，為實現(xiàn)該囊泡納米藥物的肺癌靶向聯(lián)合治療提供了可能。該囊泡對兩種藥物均有較好的裝載能力，且可以同時實現(xiàn)兩種藥物在還原條件下

8、的快速釋放。MTT實驗表明，該載藥囊泡對α3β1過表達的A549細胞有較好的靶向效果，而對α3β1低表達的正常細胞L929無作用；FACS和CLSM觀察結(jié)果顯示載有EPI·HCl的E-cNGQ/SCID-Ps可以通過受體介導的作用高效內(nèi)吞進入細胞并在細胞內(nèi)快速釋放藥物。尤其是ED-cNGQ/SCID-Ps在EPI·HCl/DTX=5/1和3/1時，對A549細胞表現(xiàn)出顯著的協(xié)同性。該還原敏感可逆交聯(lián)的靶向聚合物囊泡體系能顯著降低化療藥物