CGP37157對(duì)心肌細(xì)胞鈣循環(huán)影響的機(jī)理研究.pdf

1、目的：目前線粒體鈉鈣交換體特異性阻斷劑CGP37157對(duì)心肌細(xì)胞肌漿網(wǎng)鈣釋放、鈣回?cái)z的影響缺乏研究。因此，本實(shí)驗(yàn)旨在探討CGP37157對(duì)心肌細(xì)胞鈣循環(huán)的影響。
　　 方法：（1）心室肌組織ATP 含量的測(cè)定：32只雄性SD大鼠隨機(jī)分組，每組8只。以含60μmol/L Ca2+臺(tái)氏液（對(duì)照組）和含有CGP37157的臺(tái)氏液（實(shí)驗(yàn)組）灌流心肌組織，分別灌流15min、30min、60min。灌流結(jié)束后，用剪刀剪取左心室少許心肌組織

2、，采用ATP 檢測(cè)試劑盒（ATP Assay Kit）測(cè)定其中ATP的含量；（2）心肌細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察：分組及心肌組織的灌流方法同（1），灌流結(jié)束后，用剪刀剪取左心室少許心肌組織，用于透射電子顯微鏡的制樣及觀察；（3）心肌組織cAMP 含量的測(cè)定：分組及心肌組織灌流方法同（1），灌流結(jié)束后，用剪刀剪取左心室少許心肌組織，應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中大鼠環(huán)磷酸腺苷（cAMP）水平；（4）靜息期心肌細(xì)胞鈣循環(huán)的測(cè)定：SD大鼠，每組1

3、0只，共兩組。采用常規(guī)酶解法分離心肌細(xì)胞，F(xiàn)luo-3/AM 負(fù)載心肌細(xì)胞，用激光掃描共聚焦顯微鏡觀察；（5）收縮期心肌細(xì)胞鈣瞬變的測(cè)定：SD大鼠，每組10只，共兩組。采用常規(guī)酶解法分離心肌細(xì)胞，F(xiàn)luo-3/AM 負(fù)載心肌細(xì)胞，用全細(xì)胞膜片鉗-激光掃描共聚焦顯微鏡聯(lián)機(jī)技術(shù)同步記錄系統(tǒng)記錄各組大鼠心肌細(xì)胞L-型鈣電流（Ica,L）和胞漿內(nèi)鈣瞬變（即鈣誘導(dǎo)鈣瞬變），對(duì)照組不灌流CGP37157，實(shí)驗(yàn)組灌流CGP37157 （10μmol/

4、L）；（6）統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：利用SPSS11.5 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，所有數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（X±SD）表示，兩組間均數(shù)的比較采用t 檢驗(yàn), 率的比較采用x2 檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：（1）透射電子顯微鏡形態(tài)學(xué)觀察：CGP37157 引起心肌細(xì)胞線粒體結(jié)構(gòu)異常，表現(xiàn)為不同程度的線粒體嵴溶解，并且作用時(shí)間越長(zhǎng)，線粒體受損傷越重；（2）心室肌組織中ATP 含量的比較：對(duì)照組、15min、30min、60mi

5、n 各組測(cè)得的ATP的濃度依次是1.23±0.02 μM/L、0.75±0.01μM/L、0.44±0.02 μM/L、0.17±0.01μM/L，各實(shí)驗(yàn)組較對(duì)照組ATP 含量顯著減少（n=10, P＜0.05）；60min組較30minATP 含量顯著減少（0.17±0.01μM/Lvs0.44±0.02 μM/L, n=8, P<0.01）；（3）心肌組織中cAMP 含量的比較：CGP37157 引起心肌組織cAMP的含量增加，對(duì)照

6、組15min、30min、60min 各組測(cè)得的cAMP的含量分別為791±35pMol/g、1101±55pMol/g、1525±40pMol/g、2017±60pMol/g；60min組較對(duì)照組cAMP 含量顯著增加（n=8，P<0.05）；（4）對(duì)靜息期肌漿網(wǎng)鈣循環(huán)的影響：鈣釋放速率實(shí)驗(yàn)組（5.02±0.015）比對(duì)照組顯著增強(qiáng)（1.01±0.006，n=10，P<0.01）；鈣存儲(chǔ)實(shí)驗(yàn)組（20.2±0.8）比對(duì)照組顯著減小（0.

7、3±0.3, n=10, P＜0.01）；鈣回?cái)z速率實(shí)驗(yàn)組（1.08±0.15）與對(duì)照組沒有差異（0.99±0.09，n=10，P>0.05）；（5）收縮期心肌細(xì)胞的鈣瞬變：Ica,L的電流密度實(shí)驗(yàn)組（2.02±0.16pA/pF）比對(duì)照組顯著減少（0.69±0.07pA/pF, n=10, P<0.01）；實(shí)驗(yàn)組（45.5±5.2）大鼠CICR 過(guò)程中鈣釋放的幅度顯著低于對(duì)照組（23.2±4.8，n=10，P<0.01）。
　　

8、 結(jié)論：CGP37157 導(dǎo)致心肌細(xì)胞鈣循環(huán)的異常，原因可能為其導(dǎo)致線粒體受損和PKA通路異常。具體如下：（1）CGP37157 導(dǎo)致線粒體的損傷，表現(xiàn)為其結(jié)構(gòu)受損和ATP 合成下降。（2）CGP37157 介導(dǎo)的線粒體損傷導(dǎo)致靜息期心肌細(xì)胞鈣循環(huán)異常，表現(xiàn)為促進(jìn)肌漿網(wǎng)鈣泄漏，但不影響其鈣回?cái)z。（3）CGP37157 導(dǎo)致cAMP 增加，導(dǎo)致PKA 激活增強(qiáng)，可能導(dǎo)致靜息期肌漿網(wǎng)鈣泄漏。（4）CGP37157 導(dǎo)致收縮期心肌細(xì)胞Ica