蜘蛛香有效成分調(diào)控脂質(zhì)代謝及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：對(duì)蜘蛛香有效成分調(diào)控脂質(zhì)代謝作用進(jìn)行研究，并探討其作用機(jī)制。
　　方法：1.采用MTT法檢測(cè)不同濃度藥液對(duì)HepG2細(xì)胞存活的影響，確定以2mmol/L的油酸誘導(dǎo)建立人肝癌HepG2細(xì)胞脂肪變性模型，160μg/mL非諾貝特為陽(yáng)性對(duì)照，油紅O染色法及酶法分別檢測(cè)6、12.5、25μg/mL的蜘蛛香素E對(duì)HepG2細(xì)胞內(nèi)脂滴沉積及甘油三酯含量的變化。Western Blot法檢測(cè)HepG2細(xì)胞載脂蛋白A5(ApoA5)的蛋白表

2、達(dá)。2.采用高脂飼料建立大鼠高脂血癥動(dòng)物模型，以2mg/kg/d的辛伐他汀作為陽(yáng)性對(duì)照，灌胃7.5mg/kg/d、15mg/kg/d、30mg/kg/d的蜘蛛香總環(huán)烯醚萜。雙試劑直接法測(cè)定大鼠血清及肝組織中甘油三酯(TG)、總膽固醇(TC)、低密度脂蛋白(LDL-C)、高密度脂蛋白(HDL-C)的含量，微板法測(cè)定血清中總膽汁酸(TBA)、谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)的含量，蘇木精-伊紅(HE)染色法對(duì)肝組織進(jìn)行病理切片觀察

3、。比色法檢測(cè)大鼠肝組織中脂蛋白脂酶(LPL)、肝脂酶(HL)的活性，ELISA法檢測(cè)肝組織中載脂蛋白A5(ApoA5)、過(guò)氧化物酶體增殖物激活受體α（PPAR-α）、固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白1c（SREBP-1c）、肝X受體α(LXR-α)的蛋白表達(dá)。
　　結(jié)果：1.HepG2細(xì)胞脂肪變性模型成功建立，油紅O染色光學(xué)顯微鏡下觀察，模型對(duì)照組細(xì)胞內(nèi)出現(xiàn)了大量的脂滴沉積。與模型對(duì)照組相比，隨著蜘蛛香素E濃度的增加，細(xì)胞內(nèi)紅色脂滴的數(shù)量明顯

4、減少;6、12.5、25μg/mL蜘蛛香素E組細(xì)胞內(nèi)TG含量均具有顯著性差異(P＜0.05或P＜0.01)，且細(xì)胞內(nèi)TG含量隨蜘蛛香素E濃度的升高而減少，呈劑量依賴(lài)性。Western Blot法檢測(cè)ApoA5的蛋白表達(dá)與TG的減少呈正相關(guān)。2.大鼠高脂血癥動(dòng)物模型成功建立，與模型對(duì)照組比較，4mg/kg/d辛伐他汀組、7.5mg/kg/d、15mg/kg/d、30mg/kg/d蜘蛛香總環(huán)烯醚萜組可不同程度的減緩大鼠體重的增加;降低大鼠血

5、清及肝組織中TC、TG、LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，其中對(duì)血清TG含量的降低最為明顯，均具有顯著性差異(P＜0.01);蜘蛛香總環(huán)烯醚萜低劑量組可顯著性降低大鼠的肝臟指數(shù)(P＜0.05)，高劑量組可極顯著性降低大鼠血清TBA、ALT、AST的含量(P＜0.01);肝組織病理觀察結(jié)果顯示，低劑量組與模型對(duì)照組相比胞質(zhì)內(nèi)未見(jiàn)明顯空泡且無(wú)病變，具有保肝作用。進(jìn)一步的作用機(jī)制研究結(jié)果顯示，蜘蛛香總環(huán)烯醚萜低、高劑量組分別能極顯著性增

6、強(qiáng)LPL(P＜0.01)、顯著性增強(qiáng)HL(P＜0.05)的活性，高劑量組能極顯著性上調(diào)ApoA5、PPAR-α的蛋白表達(dá)(P＜0.01)，低、高劑量組能極顯著性下調(diào)SREBP-1c、LXR-α的蛋白表達(dá)(P＜0.01)。
　　結(jié)論：1.蜘蛛香素E可有效抑制油酸誘導(dǎo)后HepG2細(xì)胞內(nèi)脂質(zhì)堆積，其機(jī)制可能與其提高ApoA5的蛋白表達(dá)有關(guān)。2.蜘蛛香總環(huán)烯醚萜可明顯促進(jìn)高脂血癥大鼠血脂、肝脂代謝，并具有保肝作用，其機(jī)制可能與其激活PPA