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文檔簡介
1、目的:
觀察益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)及過氧化物酶體增殖物激活受體γ(Peroxisome proliferator-activatedreceptor-γ,PPARγ)與Delta樣蛋白1(Delta-like1,DLK1)表達的影響。
方法:
1.選用健康雄性大鼠110只,隨機選取10只作為正常組(N組),余100只大鼠采用“復(fù)合因素CCl4法”誘導(dǎo)肝纖維化大鼠模型。
2、2.建模成功后再隨機分為肝纖維化模型組(M組)、秋水仙堿組(C組)、益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥低劑量組(LT組)、中劑量組(MT組)及高劑量組(HT組)。
3.正常組和模型組灌服生理鹽水(3 ml/100g,每日1次),秋水仙堿組灌服秋水仙堿水溶液(0.01 mg/100g,每日1次),益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥低、中及高劑量組分別灌服1 g/ml、2 g/ml、4g/ml的益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥煎劑(3 ml/100g,每日1次)。
3、> 4.給藥12周后處死大鼠,采用HE染色和Masson染色法觀察肝組織結(jié)構(gòu)及纖維化程度,透射電鏡(transmission electron microscope,TEM)觀察肝組織及細胞超微結(jié)構(gòu),RT-PCR法檢測大鼠肝組織PPARγmRNA含量,Western blot法檢測各組大鼠肝組織內(nèi)PPARγ與DLK1蛋白表達水平。
結(jié)果:
1.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響
(1)
4、 HE染色:與正常組相比,模型組大鼠肝組織內(nèi)可見肝纖維化間隔伴小葉結(jié)構(gòu)紊亂,肝細胞脂肪變性明顯,并可見大量炎性細胞浸潤;與模型組相比,秋水仙堿組、益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥中、高劑量組肝組織形態(tài)明顯改善,脂肪變性有不同程度的減輕;而益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥低劑量組無明顯變化。
(2) Masson染色:與正常組相比,模型組可見大量膠原纖維沉積,形成厚薄不一的纖維間隔,分割包繞肝小葉;與模型組相比,益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥中、高劑量組及
5、秋水仙堿治療組的肝小葉結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常,膠原沉積明顯減少;而中藥低劑量組肝組織形態(tài)與模型組較接近。
2.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)的影響
正常組肝細胞形態(tài)正常,細胞間緊密連接,內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體及核蛋白體豐富,毛細膽管微絨毛豐富;模型組及益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥低劑量組可見肝纖細內(nèi)大量脂滴,多種細胞器腫脹且數(shù)量明顯減少,有成纖維細胞及淋巴細胞浸潤,并可見大量纖維沉積;秋水仙堿組、益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中
6、藥中劑量及高劑量組形態(tài)與正常組形態(tài)相似。
3.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠PPARγ與DLK1的影響
(1)肝組織PPARγ的表達:益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥中、高劑量組及秋水仙堿組可明顯增加大鼠肝組織細胞中PPARγ mRNA含量和蛋白表達水平,與模型組比較差異均具有顯著性(P<0.05);而益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥低劑量組PPARγ mRNA含量及蛋白表達水平與模型組相比,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.99,P=0
7、.50)。
(2)肝組織DLK1的表達:DLK1有兩種不同大小的分子,正常組幾乎不表達DLK1,模型組DLK1-L明顯高于其余各組(P<0.05),益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥各劑量治療組及秋水仙堿組表達均明顯下調(diào)。
結(jié)論:
1.中、高劑量益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥能明顯減輕大鼠肝組織纖維化程度,其作用機理可能與增加肝組織內(nèi)PPARγ的表達,抑制DLK1大分子表達有關(guān)。
2.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥的抗肝纖維化
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