冷氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠PPARγ與DLK1的影響.pdf

1、目的:
　　觀察益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)及過氧化物酶體增殖物激活受體γ（Peroxisome proliferator-activatedreceptor-γ，PPARγ）與Delta樣蛋白1(Delta-like1，DLK1)表達的影響。
　　方法:
　　1.選用健康雄性大鼠110只，隨機選取10只作為正常組（N組），余100只大鼠采用“復(fù)合因素CCl4法”誘導(dǎo)肝纖維化大鼠模型。
　　

2、2.建模成功后再隨機分為肝纖維化模型組（M組）、秋水仙堿組（C組）、益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥低劑量組（LT組）、中劑量組(MT組)及高劑量組（HT組）。
　　3.正常組和模型組灌服生理鹽水（3 ml/100g，每日1次），秋水仙堿組灌服秋水仙堿水溶液（0.01 mg/100g，每日1次），益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥低、中及高劑量組分別灌服1 g/ml、2 g/ml、4g/ml的益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥煎劑（3 ml/100g，每日1次）。

3、>　　4.給藥12周后處死大鼠，采用HE染色和Masson染色法觀察肝組織結(jié)構(gòu)及纖維化程度，透射電鏡(transmission electron microscope，TEM)觀察肝組織及細胞超微結(jié)構(gòu)，RT-PCR法檢測大鼠肝組織PPARγmRNA含量，Western blot法檢測各組大鼠肝組織內(nèi)PPARγ與DLK1蛋白表達水平。
　　結(jié)果:
　　1.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠肝組織形態(tài)學(xué)的影響
　　(1)

4、 HE染色:與正常組相比，模型組大鼠肝組織內(nèi)可見肝纖維化間隔伴小葉結(jié)構(gòu)紊亂，肝細胞脂肪變性明顯，并可見大量炎性細胞浸潤;與模型組相比，秋水仙堿組、益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥中、高劑量組肝組織形態(tài)明顯改善，脂肪變性有不同程度的減輕;而益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥低劑量組無明顯變化。
　　(2) Masson染色:與正常組相比，模型組可見大量膠原纖維沉積，形成厚薄不一的纖維間隔，分割包繞肝小葉;與模型組相比，益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥中、高劑量組及

5、秋水仙堿治療組的肝小葉結(jié)構(gòu)基本恢復(fù)正常，膠原沉積明顯減少;而中藥低劑量組肝組織形態(tài)與模型組較接近。
　　2.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠肝組織超微結(jié)構(gòu)的影響
　　正常組肝細胞形態(tài)正常，細胞間緊密連接，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、線粒體及核蛋白體豐富，毛細膽管微絨毛豐富;模型組及益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥低劑量組可見肝纖細內(nèi)大量脂滴，多種細胞器腫脹且數(shù)量明顯減少，有成纖維細胞及淋巴細胞浸潤，并可見大量纖維沉積;秋水仙堿組、益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中

6、藥中劑量及高劑量組形態(tài)與正常組形態(tài)相似。
　　3.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥對肝纖維化大鼠PPARγ與DLK1的影響
　　(1)肝組織PPARγ的表達:益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥中、高劑量組及秋水仙堿組可明顯增加大鼠肝組織細胞中PPARγ mRNA含量和蛋白表達水平，與模型組比較差異均具有顯著性(P＜0.05);而益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥低劑量組PPARγ mRNA含量及蛋白表達水平與模型組相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.99，P=0

7、.50)。
　　(2)肝組織DLK1的表達:DLK1有兩種不同大小的分子，正常組幾乎不表達DLK1，模型組DLK1-L明顯高于其余各組（P＜0.05），益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥各劑量治療組及秋水仙堿組表達均明顯下調(diào)。
　　結(jié)論:
　　1.中、高劑量益氣化瘀化痰養(yǎng)陰中藥能明顯減輕大鼠肝組織纖維化程度，其作用機理可能與增加肝組織內(nèi)PPARγ的表達，抑制DLK1大分子表達有關(guān)。
　　2.益氣化瘀化痰養(yǎng)陰法中藥的抗肝纖維化