產(chǎn)氣腸桿菌耐藥特性及其質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因研究.pdf

1、目的：
　　 1．了解溫州醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院2005年～2010年間臨床分離腸桿菌屬細(xì)菌的分布情況及耐藥特性，為臨床抗菌藥物選擇提供依據(jù)。
　　 2．研究2005年～2010年不依賴耐藥背景的產(chǎn)氣腸桿菌臨床連續(xù)分離株中質(zhì)粒介導(dǎo)喹諾酮類耐藥基因的分布和特性。
　　 3．研究質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因與ESBL攜帶率的相關(guān)性，并分析其與不同抗菌藥物耐藥性的關(guān)系。
　　 方法：
　　 1．回顧性調(diào)查20

2、05年～2010年間臨床分離腸桿菌屬細(xì)菌的臨床感染分布特點，分析腸桿菌屬細(xì)菌的耐藥性及變遷情況。
　　 2．PCR篩選產(chǎn)氣腸桿菌質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因(qnr，aac(6)-Ib-cr，qepA)及ESBLs基因，陽性產(chǎn)物進行DNA測序以確定基因型。
　　 3．選取14株P(guān)MQR基因陽性菌株進行接合轉(zhuǎn)移試驗，以探討質(zhì)粒介導(dǎo)的喹諾酮類耐藥基因的轉(zhuǎn)移性，PCR驗證接合子的耐藥基因，E-test法測受體菌、接合子MIC;瓊

3、脂稀釋法檢測供體菌MIC，分析耐藥基因與耐藥性的關(guān)系。
　　 結(jié)果：
　　 1．本研究6年間共收集腸桿菌屬細(xì)菌273株，其中以陰溝腸桿菌最多，含173株(63.4％)，其次為產(chǎn)氣腸桿菌93株(34.1％)，聚團腸桿菌3株(1.1％)，河生腸桿菌3株(1.1％)，中間腸桿菌1株(0.3％)。按標(biāo)本來源分，以痰液標(biāo)本最多，占46.5％(127/273)，其次為尿液、膿液、血液和引流液等。臨床常用抗菌藥物中，敏感性最好的為亞胺

4、培南，273株中僅有4株耐藥，敏感率達(dá)98.5％；其次為左氧氟沙星(敏感率74.8％)和環(huán)丙沙星(敏感率74.0％)，耐藥率最高的是氨芐西林，耐藥率達(dá)99.2％；其次是頭孢曲松。ESBLs的總檢出率高達(dá)55.3％，各年度檢出率都維持在50％左右的高水平。
　　 2.93株產(chǎn)氣腸桿菌中共檢出31株攜帶PMQR基因，其中有11株同時攜帶兩種以上PMQR基因。qnr基因陽性菌株27株，qnrA共4株，qnrB共8株，qnrS共19株，

5、經(jīng)BLAST比對分析，基因型包括qnrS1、qnrB2、qnrB4、qnrB6和qnrA1;測得的序列與GenBank中已登錄的qnr基因家族序列100％同源，未見突變株。未檢出qnrC、qnrD基因。
　　 3.93株產(chǎn)氣腸桿菌中，aac(6’)-Ib基因陽性菌株為14株，陽性率為15.1％，對陽性菌株進行DNA測序、BLAST比對，其中6株為aac(6’)-Ib-cr，2株為aac(6’)-Ib的變異株，變異株為第119位氨

6、基酸與第173位氨基酸的突變。其余6株均為aac(6’)-Ib野生型。
　　 4．本研究93株產(chǎn)氣腸桿菌中未檢出qepA基因。
　　 5.31株P(guān)MQR基因陽性菌株中有17株同時攜帶ESBLs基因，而62株P(guān)MQR基因陰性菌株中僅10株攜帶ESBLs基因，兩者存在顯著性差異(P＜0.01)。PMQR基因陽性和陰性株細(xì)菌對喹諾酮類和氨基糖苷類的耐藥率無統(tǒng)計學(xué)差異，對三代頭孢菌素耐藥率和ESBLs陽性率存在顯著性差異(P＜0

7、.01)。
　　 6.14株P(guān)MQR基因陽性菌株中，接合轉(zhuǎn)移試驗成功7株，接合子對多種抗菌藥物的MIC有不同程度的提升。特異性PCR證實接合子和供體菌具有相同的耐藥基因。
　　 結(jié)論：
　　 1．臨床分離腸桿菌屬細(xì)菌耐藥嚴(yán)重，對多種臨床常用抗菌藥物的不敏感率在40％以上，對亞胺培南敏感性最高，環(huán)丙沙星，左氧氟沙星的敏感性也較高，可作為臨床腸桿菌屬細(xì)菌感染的首選。
　　 2．我院產(chǎn)氣腸桿菌PMQR基因以qn

8、r基因為主，其次為aac(6’)-Ib-cr基因，qnr基因中以qnrS為主，基因亞型包括qnrS1、qnrB2、qnrB4、qnrB6、qnrA1，未檢出qepA基因。
　　 3．本研究以不考慮耐藥背景的產(chǎn)氣腸桿菌為研究對象，系統(tǒng)的檢測PMQR基因，在國內(nèi)首次報道在產(chǎn)氣腸桿菌中檢出qnrB、qnrS和aac(6’)-Ib-cr基因，并證實PMQR基因在喹諾酮類耐藥和敏感菌株中均存在，喹諾酮類藥物敏感菌株中PMQR基因的檢出值得