橘小實(shí)蠅生殖系統(tǒng)細(xì)菌分子多態(tài)性及引誘性研究.pdf

1、橘小實(shí)蠅(Bactrocera dorsalis)是我國一種重要的毀滅性果蔬害蟲,隸屬于雙翅目(Diptera)、實(shí)蠅科(Tephritidae)、果實(shí)蠅屬(Bactrocera Macquart),嚴(yán)重為害40多個(gè)科250多種水果和蔬菜,食性雜、繁殖力強(qiáng)、傳播快、危害大,防治困難,被世界各國列為水果“頭號(hào)殺手”。本文通過PCR-DGGE技術(shù)研究橘小實(shí)蠅雌雄成蟲生殖系統(tǒng)內(nèi)的細(xì)菌群落,在此基礎(chǔ)上,采用德國生物梅里埃公司的API20E試劑盒

2、鑒定橘小實(shí)蠅雌性生殖系統(tǒng)內(nèi)的可培養(yǎng)細(xì)菌并分析其發(fā)酵液的引誘活性,最終為了解該昆蟲與微生物的協(xié)同進(jìn)化關(guān)系和利用微生物防治此類害蟲提供新的思路和科學(xué)依據(jù)。本文的主要研究結(jié)果如下:
　　 1.從橘小實(shí)蠅雌性生殖系統(tǒng)中共分離得到屬β-變形菌綱(Betaproteobacteria)、芽孢桿菌綱(Bacilli)、α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)、γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)和放線菌綱(Ac

3、tinobacteria)5個(gè)不同的細(xì)菌綱30個(gè)可分類操作單元(opermionaltaxonomic units,OUTS)。其中屬于γ-變形菌綱的細(xì)菌有20個(gè),占整個(gè)細(xì)菌群落的66.7％,其余10種分別屬于腸桿菌目(Enterobacteriales)的摩根(氏)菌屬(Morganella)、克呂沃氏菌屬(Ktuyvera)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、拉烏爾菌屬(Raoultella)、腸桿菌屬(Enterobacte

4、r)和腸桿菌科的未知屬,黃色單胞菌目(Xanthomonadales)的嗜麥芽窄食單胞菌屬(Stenotrophomonas)和未分類的γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)的細(xì)菌。以上屬于腸桿菌科的細(xì)菌有17種,是雌性生殖系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)菌群。屬于芽孢桿菌綱(Bacilli)的細(xì)菌有5種,占整個(gè)雌性生殖系統(tǒng)的16.7％,分屬芽孢桿菌目(Bacillales)的芽胞桿菌屬(Bacillus),乳桿菌目(Lactobacilla

5、les)的乳球菌屬(Lactococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)和未分類的鏈球菌科(Streptococcaceae)。屬于β-變形菌綱(Betaproteobacteria)的細(xì)菌有3種,占整個(gè)雌性生殖系統(tǒng)的1.0％,分屬伯克氏菌科(Burkholderiaceae)的伯克氏菌屬(Burkholderia)產(chǎn)堿菌科(Alcaligenaceae)無色桿菌屬(Achromobacter)。屬于α-變形菌綱(Alphap

6、roteobacteria),屬于根瘤菌目(Rhizobiales)布魯氏菌科(Brucellaceae)蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)的細(xì)菌有1種,占整個(gè)細(xì)菌群落的0.6％,是雌性生殖系統(tǒng)的較少種類的菌群。屬于放線菌綱(Actinobacteria)放線菌目(Actinomycetales)纖維單胞菌科(Cellulomonadaceae)纖維單胞菌屬(Cellulomonas)的細(xì)菌有1種,占整個(gè)雌性生殖系統(tǒng)的0.6％,是雌

7、性生殖系統(tǒng)的較少種類的菌群。
　　 2.在橘小實(shí)蠅的雄性生殖系統(tǒng)中我們分離得到19個(gè)OUTs,分屬β-變形菌綱(Betaproteobacteria)、芽孢桿菌綱(Bacilli)、α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)和γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)4個(gè)不同的細(xì)菌綱。在所有分離到的細(xì)菌中,屬于γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)的細(xì)菌有11個(gè),占整個(gè)雄性生殖系統(tǒng)的57.

8、89％,是雄性生殖系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)菌綱,分屬腸桿菌目(Enterobacteriales)的摩根(氏)菌屬(Morganella)、檸檬酸桿菌屬(Citrobacter)、腸桿菌屬(Enterobacter)和腸桿菌科的未知屬,假單胞菌目(Pseudomonadales)的不動(dòng)細(xì)菌屬(Acinetobacter),未分類的γ-變形菌綱(Gammaproteobacteria)的細(xì)菌。屬于芽孢桿菌綱(Bacilli)的細(xì)菌有5個(gè),占整個(gè)雄性生殖

9、系統(tǒng)的26.32％,分屬芽孢桿菌目(Bacillales)的芽胞桿菌屬(Bacillus),乳桿菌目(Lactobacillales)的乳球菌屬(Lactococcus)、漫游球菌屬(Vagococcus)、腸球菌屬(Enterococcus)和未分類的鏈球菌科(Streptococcaceae)。屬于β-變形菌綱(Betaproteobacteria)的細(xì)菌有2種,占整個(gè)雄性生殖系統(tǒng)的10.53％,分屬伯克氏菌科(Burkholder

10、iaceae)的青枯菌屬(Ralstonia)和未分類的產(chǎn)堿菌科(Alcaligenaceae)。屬于α-變形菌綱(Alphaproteobacteria)的細(xì)菌有1種,占整個(gè)雄性生殖系統(tǒng)的5.26％,是雄性生殖系統(tǒng)的最少種類的菌群,屬于根瘤菌目(Rhizobiales)布魯氏菌科(Brucellaceae)蒼白桿菌屬(Ochrobactrum)。
　　 3.在橘小實(shí)蠅的雌性生殖系統(tǒng)中分離得到10種可培養(yǎng)菌群,分別是植生拉烏爾菌

11、(Raoultella planticola)、產(chǎn)氣腸桿菌(Enterobacter aerogenes)、日溝維腸桿菌(Enterobacter gergoviae)、河生腸桿菌(Enterobacter amnigenus)、解鳥氨酸拉烏爾菌(Raoultella ornithinolytica)、阪崎腸桿菌(Enterobacter sakazakii)、陰溝腸桿菌(Enterobacter cloacae)、肺炎克雷伯菌肺炎亞種

12、(Klebsiella pneumoniaesubsp.pneumoniae)、土生拉烏爾菌(Raoultella terrigena)、產(chǎn)酸克雷伯菌(Klebsiellaoxytoca)。以上細(xì)菌發(fā)酵液的室內(nèi)和野外引誘實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,土生拉烏爾菌(R.terrigena)、產(chǎn)酸克雷伯菌(K.oxytoca)和植生拉烏爾菌(R.planticola)對(duì)橘小實(shí)蠅具有較強(qiáng)的引誘效果,且引誘活性為土生拉烏爾菌(R.terrigena)>產(chǎn)酸克雷