基于iTRAQ技術(shù)炎癥刺激下成骨細胞分化相關(guān)蛋白組學(xué)分析及藥靶蛋白Elp2功能初步研究.pdf

1、南方醫(yī)科大學(xué)2 0 1 1 級博士學(xué)位論文基于i T R A Q 技術(shù)炎癥刺激下成骨細胞分化相關(guān)蛋白組學(xué)分析及藥靶蛋白E l p 2 功能初步研究P r o t e o m e a n a l y s i so f i n f l a m m a t i o n o no s t e o b l a s td i f f e r e n t i a t i o nb y i T R A Q a n d p r e l i m i n a

2、 r yf u n c t i o n a l s t u d i e so fE L P 2 a s ad r u g t a r g e t課題來源：國家自然科學(xué)基金面上項目( N O ．8 12 7 2 0 5 2 )廣東省自然科學(xué)基金( N O ．$ 2 0 1 1 0 1 0 0 0 3 8 5 5 )專 業(yè) 名 稱學(xué)位申請人指 導(dǎo) 教 師答辯委員會主席答辯委員會成員骨外科學(xué)許長鵬余斌 教授( 主任醫(yī)師、博士生導(dǎo)師)白 波 教

3、授歐陽鈞教授倪國新教授2 0 1 4 年4 月2 0 日 廣州摘要的促炎性細胞因子之一，T N F ．C 【除參與介導(dǎo)免疫應(yīng)答外，還通過誘導(dǎo)局部炎癥反應(yīng)和調(diào)節(jié)外周組織細胞的增殖、分化、凋亡和功能活性影響組織器官的發(fā)育和功能。而T N F —O t 對成骨細胞功能的調(diào)節(jié)則表現(xiàn)在以下幾個方面：( 1 ) T N F ．O t直接抑制成骨細胞的分化成熟及成骨；( 2 ) T N F ．僅刺激成骨細胞分泌破骨性調(diào)節(jié)因子進而促進骨吸收；( 3 )

4、 T N F ．0 【誘導(dǎo)成骨細胞凋亡、減少其數(shù)目從而抑制骨形成；( 4 ) T N F ．O t 影響其他促分化細胞因子或生長因子對成骨細胞的調(diào)節(jié)作用。體外實驗?zāi)壳耙炎C實T N F ．。c 可抑制成骨細胞關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子如R u n x 2 和O s t e r i x 因子的表達。其中T N F ．O t 對R u n x 2 的抑制作用主要通過造成R u n x 2 m R N A 的失穩(wěn)定進而影響細胞凋亡；并且T N F ．0 【

5、還通過對成骨細胞內(nèi)的S m u r f l 和S m u r f 2 因子的增量調(diào)節(jié)來促進R u n x 2 的降解。而T N F ．僅對O s t e r i x 抑制則通過獨立的機制，即通過包括M A P K ，神經(jīng)酰胺和氧自由基等信號傳導(dǎo)通路間接抑制O s t e r i x 活性，進而抑制成骨細胞分化。盡管如此，T N F ．O t 抑制成骨細胞的機制復(fù)雜仍不甚清楚。因此探索炎癥刺激影響成骨細胞分化的機制，尋找潛在的理想藥靶阻止

6、炎癥因子對骨再生的抑制，一直是該研究領(lǐng)域密切關(guān)注并亟待解決的問題。蛋白質(zhì)組學(xué)在成骨分化研究方面的研究炎癥刺激作用下成骨細胞分化的過程存在復(fù)雜精密的調(diào)節(jié)體系，涉及諸多信號通路的調(diào)控。考慮到信號通路之間存在的交談( c r o s s t a l k ) 作用，加之既往研究多通過某一條或某幾條通路入手，因此難以全面地解釋成骨細胞在炎癥刺激作用下的分化過程。同時前期的研究多數(shù)通過單個靶點阻斷單一信號通路干預(yù)炎癥對成骨細胞分化的抑制。而多靶點組

7、成的靶場干預(yù)應(yīng)該是阻止炎癥因子對骨再生抑制的發(fā)展方向。只有通過對炎癥刺激影響成骨細胞分化的機制深入了解，發(fā)現(xiàn)潛在的特異性和可藥性靶標(biāo)，才能做到有的放矢，針對組合靶標(biāo)開發(fā)新的促進炎癥刺激下成骨細胞分化的藥物。后基因組時代，蛋白質(zhì)作為生物功能的執(zhí)行者已經(jīng)成為生命科學(xué)領(lǐng)域的研究熱點。蛋白質(zhì)組學(xué)是對機體、組織或細胞的全部蛋白質(zhì)的表達水平、蛋白修飾與功能、蛋白之間的相互作用等進行高通量的篩選和分析，比傳統(tǒng)的單個基因研究或單個蛋白研究更能增加疾病診