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文檔簡(jiǎn)介
1、番茄(Lycopersicon esculentum Mill)原產(chǎn)于南美洲的秘魯、厄瓜多爾、玻利維亞一帶,是茄科番茄屬的一年生草本植物。由于其果實(shí)營(yíng)養(yǎng)豐富,口感佳,色澤鮮艷,栽培廣泛,產(chǎn)量高,深受全世界人民的喜愛(ài),其市場(chǎng)需求量大。據(jù)世界糧農(nóng)組織統(tǒng)計(jì),1994年至2006年全球番茄出口貿(mào)易總額由41億美元增長(zhǎng)到80億美元,而我國(guó)番茄生產(chǎn)居全球第一。但隨著番茄需求的增加,番茄保護(hù)地連種,各種病害隨之蔓延,造成番茄減產(chǎn)甚至絕產(chǎn),給番茄產(chǎn)業(yè)帶
2、來(lái)巨大經(jīng)濟(jì)損失。
近年來(lái)番茄芝麻斑點(diǎn)病害在多地爆發(fā),給番茄生產(chǎn)帶來(lái)嚴(yán)重威脅,該病在河南、廣西、浙江、江蘇一帶菜區(qū)發(fā)生較為普遍,危害較重,我省許多地區(qū)也有發(fā)生,呈加重和蔓延趨勢(shì)。目前,番茄芝麻斑點(diǎn)病的抗性機(jī)理尚不是很清楚,也沒(méi)有抗性基因的相關(guān)報(bào)道,這在很大程度上影響了對(duì)番茄芝麻斑點(diǎn)病的控制。因此,對(duì)番茄芝麻斑點(diǎn)病抗性機(jī)理的研究具有重要意義?!昂蠡蚪M時(shí)代”的到來(lái),使功能基因組學(xué)(Functional genomics)成為研
3、究的重點(diǎn),蛋白質(zhì)組學(xué)(proteomics)則是其“中流砥柱”。目前還沒(méi)有人用蛋白組學(xué)來(lái)系統(tǒng)的、全面的研究番茄對(duì)該病應(yīng)答的分子機(jī)理,抗病相關(guān)的蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò)沒(méi)有研究,因此,運(yùn)用雙向電泳技術(shù)對(duì)番茄抗、感品種的蛋白質(zhì)組差異進(jìn)行研究,探究其蛋白調(diào)控網(wǎng)絡(luò),迫在眉睫,具有深遠(yuǎn)意義。
本試驗(yàn)首先進(jìn)行了番茄抗病種質(zhì)資源的篩選,以東北農(nóng)業(yè)大學(xué)番茄研究所提供的50份番茄品種為材料,利用人工接種技術(shù)對(duì)不同番茄品種進(jìn)行苗期接種鑒定,鑒定方法組合為
4、:摩擦接種法,接種苗齡為4片真葉,芝麻斑點(diǎn)病菌孢子液濃度為1×107個(gè)孢子/mL。篩選結(jié)果為:抗病品種2個(gè),09605和09009;中抗品種14個(gè);感病品種28個(gè),為09011等,極感病品種6個(gè)。
在雙向電泳研究中,對(duì)蛋白質(zhì)雙向電泳體系進(jìn)行了部分優(yōu)化,包括樣品的破碎方法、研磨時(shí)間和蛋白樣品上樣量,結(jié)果表明,研缽研磨的更充分,研磨時(shí)間10min,獲得的蛋白質(zhì)樣品濃度大,更適合后續(xù)的分析,上樣量為1200ug時(shí),凝膠圖譜中蛋白
5、點(diǎn)最多。
利用雙向電泳技術(shù),選取番茄抗、感品種09605和09011為試驗(yàn)材料,進(jìn)行番茄芝麻斑點(diǎn)病菌脅迫下的差異蛋白組學(xué)研究。經(jīng)過(guò)重復(fù)試驗(yàn),得到了較為成熟的番茄葉總蛋白雙向電泳體系,研究番茄抗、感品種在番茄芝麻斑點(diǎn)病菌脅迫下,蛋白質(zhì)組的變化。經(jīng)試驗(yàn)分析,最終得到了33個(gè)差異蛋白點(diǎn),其中09605(抗)接菌后,與對(duì)照相比,表達(dá)量上調(diào)蛋白點(diǎn)8個(gè),表達(dá)量下調(diào)蛋白點(diǎn)9個(gè),新增蛋白點(diǎn)1個(gè);09011(感)接菌后,與對(duì)照相比,表達(dá)量上
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